流式细胞计量术

癌症研究和治疗领域的最新突破出现在免疫肿瘤学领域,通过使用新型免疫疗法来增强宿主的免疫系统,从而更有效地以肿瘤为靶标并破坏肿瘤细胞。FDA批准的、具有免疫调节活性的治疗方法包括基于抗体和细胞因子的免疫疗法、小分子药物和基于细胞的疗法。由于这些疗法及其他疗法在延长生存期方面取得了成功,因此人们已将重点放在研发新的单药和联合疗法上,这些疗法在治疗癌症方面具有更高的功效。

免疫疗法的有效研发需要对肿瘤微环境、外周血和其他宿主组织中的免疫系统进行高通量和强大的定量分析。

为满足这一需求,我们签约合作的流式细胞仪服务为您提供先进、最新的分析流式细胞仪资源,以支持您药物研发的各方面需求。与我们一同进行样本生成研究,或将您的临床前或非CLIA监管的临床样本隔夜运送给我们,我们将为您完成流式细胞术相关的工作。


从基础到全面的免疫分析

凭借50多年的综合专业知识,我们提供全方位服务的分析团队可为任何体内研究增添体外流式细胞术组。我们的标准化抗体组列表(请参见下文)已在多种体内癌症模型中得到验证,并为广泛的淋巴和髓系免疫亚群的全面分析奠定了基础,以记录体内受试药物治疗触发的免疫应答转变。请参阅下方的测试套组列表。

基本T细胞测试套组

小鼠4T1乳腺癌模型中的肿瘤浸润CD4+和CD8+ T细胞分析。

评估新免疫疗法的免疫调节作用时,肿瘤浸润性T细胞的定量测量至关重要。基本T细胞测试套组可提供T细胞亚群测量,并已在多种组织类型中得到验证。在上述研究中,对植入4T1乳腺的乳脂垫中的T细胞亚群进行了离体分析。首先通过对CD45+造血细胞进行门控来鉴定CD3+ T细胞。 然后,基于CD4和CD8谱系标记物表达进一步分析T细胞群。

小鼠4T1乳腺癌模型中的肿瘤浸润CD4+和CD8+ T细胞分析。
基本T细胞和B细胞测试套组

小鼠脾脏中的T细胞和B细胞亚群分析。

基本T和B细胞测试套组可用于对异质样本中的CD4+和CD8+ T细胞以及B细胞组分进行定量测量。该测试套组仅占用6个荧光通道,这可留出若干通道,用于对其他抗体进行进一步的细胞表征。上述研究中,在活细胞圈门中分析了CD3+ T细胞和CD19+ B细胞。T细胞进一步细分为CD4+和CD8+细胞群。

调节性T细胞测试套组

小鼠CT.26大肠肿瘤模型中的调节性T细胞分析

调节性T细胞可在多种疾病模型中抑制抗肿瘤反应,并且是新免疫疗法的一种备受欢迎的靶标。调节性T细胞测试套组是对基本T细胞测试套组的扩展,可用于评估靶向调节性T细胞的新疗法的疗效。在上述研究中,对来自CT.26腺癌宿主脾脏中的调节性T细胞进行了离体分析。首先通过对CD45+CD3+细胞进行门控来鉴定CD4+ T细胞。基于CD25和FoxP3的共表达进一步区分调节性T细胞。
小鼠CT.26大肠肿瘤模型中的调节性T细胞分析
T细胞活化/衰竭测试套组
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鼠A20 B细胞淋巴瘤模型中的T细胞活化分析

在研发新免疫疗法过程中面临的一项挑战是克服肿瘤微环境内T细胞中抗肿瘤活性的丧失。这是一种称为T细胞衰竭的状态,可以根据不同免疫检查点和活化标记物的相对表达来确定。T细胞活化/衰竭测试套组是基本T细胞测试套组的扩展,可用于测量不同组织中指定的关键生物标记物的表达。在上述研究中,对A20细胞系来源肿瘤内T细胞亚群的免疫检查点蛋白质CTLA-4和PD-1以及替代性增殖标记物Ki-67的表达进行了测量。

综合T细胞测试套组
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使用T细胞测试套组将CD4+、CD8+和调节性T细胞分析与免疫检查点/活化标记物研究相结合

综合T细胞测试套组结合了基本、调节和T细胞活化/衰竭测试套组的功能,可对组织内的T细胞特征进行全面分析。上方数据展示了 (A) 使用4T1乳腺癌模型对小鼠肿瘤进行的CD4+/CD8+ T细胞亚群分析,(B) 来自CT.26结直肠腺癌小鼠脾脏中的调节性T细胞分析,以及 (C) CTLA-4、PD-1和Ki-67在来自A20(B细胞淋巴瘤)细胞系肿瘤的T细胞亚群中的表达水平。
天然杀伤细胞测试套组

CT.26结直肠腺癌模型中的天然杀伤(NK)细胞和树突状细胞(DC)亚群分析

NK细胞亚群以其抗肿瘤活性和控制多种肿瘤生长的能力而闻名。DC同时具有促肿瘤和抗肿瘤功能,是基于疫苗的免疫疗法的靶标。NKDC(又名IKDC)已显示具有NK细胞和DC的功能特征。天然杀伤细胞测试套组可用于鉴定这些亚群。开展上述研究以对肿瘤来源Ly6G-Ly6C免疫细胞中NK细胞、DC和NKDC亚群的百分比进行定量测量。

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骨髓来源抑制细胞测试套组

鼠CT.26结直肠癌模型中的骨髓衍生抑制细胞(MDSC)分析

MDSC亚群可以影响多种促肿瘤反应,包括免疫功能抑制,并且是备受欢迎的免疫治疗靶标。它们是一种异质细胞群。其表型可以通过肿瘤微环境中的信号来塑造。上方数据说明了MDSC测试套组如何用于CT.26来源肿瘤中粒细胞(G-)和单核细胞(M-)MDSC亚群的基本鉴定。在排除CD3+CD19+淋巴细胞后,首先在CD45+圈门中鉴定出CD11b+髓样细胞。G-MDSC和M-MDSC根据Ly-6G和Ly-6C表面受体的表达进一步区分。

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扩展型髓样测试套组

在鼠CT.26结直肠肿瘤模型中,分析骨髓来源的抑制细胞(MDSC)、自然杀伤(NK)细胞和树突状细胞(DC)亚群。

扩展型髓样测试套组是基本MDSC测试套组的扩展,可以分析除MDSC细胞群外的NK和DC亚群。在所示数据中,这些亚群在CT.26来源肿瘤中得到了分析。单核细胞(M-)和粒细胞(G-)MDSC分别表达高水平的Ly-6C和Ly-6G蛋白质(高表达)并共表达CD11b标记物。NK和DC在MDSC排除门中得到分析,并根据pan-NK标记物(CD49b和CD335)与DC特异性CD11c蛋白质表达进行进一步区分。红色和灰色峰分别代表CD11b染色和未染色的细胞。

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综合髓样测试套组
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使用MI Bioresearch综合髓样测试套组对肿瘤中的髓样细胞进行分析

综合髓样测试套组基于基本髓样来源抑制细胞测试套组,可对髓样细胞群进行更深入的分析。它还可以分析肿瘤和免疫细胞亚群上的免疫抑制受体PD-L1。上方数据证明了如何使用“综合髓样测试套组”以 A)测量肿瘤和免疫细胞(4T1乳腺癌模型)上的PD-L1表达;B)定量测量巨噬细胞和树突状细胞亚群(CT.26结直肠肿瘤模型);C)表征MDSC亚群的CD115表达,后者是一种已被证明与抑制活性(CT.26结直肠肿瘤模型)直接相关的受体。该测试套组也有助于分析中性粒细胞和单核细胞的数量(未显示)。红色和灰色峰分别代表针对靶抗原染色的细胞和未染色的细胞。

M1和M2肿瘤相关巨噬细胞测试套组
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CT.26结直肠腺癌模型中经典(M1)和替代(M2)活性肿瘤相关巨噬细胞分析。

M1和M2巨噬细胞是驻留在肿瘤微环境中的两个主要巨噬细胞群。它们在癌症进展方面具有相反的功能,因此是新免疫疗法的靶标。上述研究展示了如何使用M1和M2肿瘤相关巨噬细胞测试套组来分析这两个细胞群的比例。为此,排除了MDSC亚群,以便可以鉴定CD11b+/F480+巨噬细胞。 对此细胞分级的M2巨噬细胞(CD206+)和M2巨噬细胞(CD206-MHCII+)进行了分析。