通讯流式细胞术确定临床前前汽车t细胞的持续在性

在临床临床批发中程中,经常使用小圈作用为测试闻到于对象来car疗疗法。在这种情况下,免疫功能低下的小鼠携带人源性肿瘤负荷,并并同种繁体人类汽车t细胞给药。在工程化综合繁体的引导引导下,过继转移细胞细胞肿瘤细胞表面(例如cd19)结合。由于工程变为肿瘤细胞细胞合,t细胞在MHC不含限制的区域中间化化并杀死肿瘤细胞。我们关键词前研研中小鼠的多个定义的数,评估肿瘤的生长和负荷确定汽车t细胞的功效(了解有关〖通通生物发球成〗(bli)确定功效的更多信息

Car t细胞抗肿瘤反应成成像的关键词是向宿主输注后轿车t出发的时间长度(持续现出者)。尽管具用了完全功能,但经证明,如果汽车t细胞持续ー存地在性不统一会限制有限的抗肿瘤反应。1在临床环境中,血液恶性肿瘤患者的长长缓解与与与与与的持续的。2共刺激信号概念为会影响影响细胞扩增,包含前研,包含4-1bb共激域的汽车构造的功效与轿车t细胞长与与站,缓慢和持续的效应子功能以及比例较高于记忆细胞有关。3.在临床临床研研别研究中评估评估评估持续ー存在性性确定临床成池具体。

本科技为之有关在临床临床环境中间用途术术。

针对汽车t细胞候选评估的小鼠模型

2017年9月,美国饰品饰品监督监督局了首个个个细胞首首诺诺此由由由由诺诺公司销售,名为kymriah.kymriah也被称Tisagenlecleucel.,已被批准用手不依然对对细胞急性淋巴细胞的标准法产物产药的儿童和年度人.kymriah基因宾夕法尼亚大学的卡尔六月博士针对nsgTM值小鼠开启的杂交作品。

nod.cg-PRKDCSCID.Il2rgtm1wjl./SzJ小鼠,俗称NODSCID.伽玛(NSG™),不达达PRKDC基础,也不达达x连锁的Il2rg基调。SCID.(严重结合免疫缺陷)突变位于DNA修复修复合并蛋白prkdc中,导致小鼠b细胞和细胞细胞缺乏这些杀伤(nk)细胞,并且细胞细胞子信号传导通讯不锈钢。这些这些使为理想的选择,并且高度融合植入人体免疫免疫(包括轿车t细胞)。小鼠植入了多种人物肿瘤,并且是临床前汽车t细胞研研黄金标准。

在我们的临床临床学位学部门,我们可以使用任何市场的小型品系进行车行进车辆t细胞细胞法和其他过继性细胞移植细胞细胞细胞移植移植移植移植研移植移植移植移植研移植移植TM值小鼠,在某些条件下,我们也可接受特种小鼠。

来自临床前肿瘤学的坚持不懈TM值试剂盒最少只需5 ul全血便可生成纵向car t细胞持续存ー存在数据。它它用具的裂解/免试剂盒具有灵活性。该该盒具体形式。该该盒具体形式。该该盒具体形式。中游特价的抗抗。杰克逊(美国缅因缅因巴港)的nsg小鼠被给予了2x107.人造PBMC,在给药后7,14和21天抽取抽取全,并并persistencetTM值试剂盒评估。

表1介绍了persistencetTM值试剂盒中间使用的试剂。图1详细介绍了门控。

繁体/染料

描述

MCD45

小鼠全造血细胞

HCD45.

人民全造血细胞

HCD3.

人类Pan-T细胞含物

HCD4.

人物CD4+t细胞细胞物

HCD8.

人物CD8+t细胞细胞物

计数微珠

提供绝对数

活性染料

死细胞排除

可选:CAR特异性

FITC、PE或APC

表1:PersistenceTTM值繁体试剂盒及其其使使使用。

档案
图1:使用persistencettm试剂盒分享人类t细胞。门控策略从双重(a)开始,然后转向结合微珠光和微珠转向数门(b)。排除下一页细胞碎片(c),并使用具具抗人cd45(d)的抗小鼠cd45将小鼠细胞与人类区区区开。通过抗人cd3门控(e)分类人物t细胞,最后确定人cd8 +和cd4 + t细胞的数量(f)。

使用PersistenceTTM值试剂盒对汽车t细胞进行纵向表型表型鉴定

临床临床学环境中,CAR T细胞的扩增和持续存在性与患者的应答和获得缓解有关。4.由于这一发诗,建立可口的车辆t细胞数量若要方法 - 为之,不在在评估车t细胞疗法的有力方面,而且在临床前环境中的安全性。临床汽车t细胞疗法的严重作业使用引起引起注意,其中间最严重的一代(crs),它与体育轿车t细胞的相关体育5.

Persistencet.TM值试剂盒可直接用于评估随推移从小鼠鼠上的装饰品中人物轿车的数量。由于由于血销量低,可口多次同同小鼠中采集样本,也可口用来一甲小鼠来达成研研。毒枭可采本接受接受严重研究,以进行有针对性的车辆。如何使用persistencetTM值试剂盒销量分时推移nsg小鼠中人类t细胞的实例请见图2。

图2. 在21天内测量小鼠中人类T细胞的持续存在性。
图2. 在21天内测量小鼠中人类T细胞的持续存在性。

改善汽车t细胞的持续在性

体育车辆t细胞的持续现在临床疗效替代指标指标指标疗效指标指标。研明,某些含的。特价的4-1bb(tnfsf9)共刺激域减少了耗竭表型。这可以有象子为主解释针对患复性或难治性急性细胞白血病的患者的临床试验中,表达cd28域的Car t细胞据报告可在您达达3月份,而具有4-1bb域的汽车t细胞可在达达5年,几乎可以评估的没有案例超过6个月。6.

多代汽车t细胞

CarT细胞UTONGESINGINGSONGS的修饰修饰继续继续化。每个轿车T.SSCFV(单链片段送).SCFV是(vh)可和轻链(vl)可变区的联合.scfv是免疫球蛋白的vh和vh的vh和vl的含量,与10和25氨基体之间的短接头肽连接。

第一代载有利的外部综合征,铰链区,跨膜域和一卷更多个细胞信号传导域。当没有用途于都具传导域内信号传导的cd3ζ链域,并且是t∈细胞信号的主要发抖者。共共刺激(CD28或4-1bb)是第二代汽车的特性。目的是改善t细胞增殖,细胞细胞子分类和体内持续。

临床前数码说明,与第二代轿车相比,第三代汽车有很好的效应子功能和更长轿车有多个刺激域(cd28-41bb或cd28-OX40)。装饰车和卡车(杀死普遍细胞因子的重定向汽车T.细胞(CART.CellsR.编辑为狂欢Cytokine.K.illing))是有时候的名为代代的名牌。第四代汽车t细胞可包含增强扩增扩增,抗肿瘤活性和持续现出的。7.

无论无论一卷汽车或卡车,PersistencetTM值是在临床前中间或或监测体内轿车t细胞持续现出者。

总结

使用科文斯临床前肿瘤肿瘤的persistencettm试剂试剂可在性。我们的流式细胞术盒可从少中间确定纵向纵向纵向持续纵向纵向持续ー持续ー存在性。我们的人的人物compttm♥(表2)是一件儿好的燕子,说明了如何将其他其他符要求要求的试剂盒添添到临床前轿车car t angers ock oils car t anting,以生成全面的术数。


繁体/染料

描述

HCD45.

人民全造血细胞

HCD3.

人类Pan-T细胞含物

HCD4.

人物CD4+t细胞细胞物

HCD8.

人物CD8+t细胞细胞物

HCD25

人物调节性t细胞含有物

hFoxP3

人物调节性t细胞含有物

hPD-1

人类t细胞抑制信号传导蛋白

HCD69.

活化物质

ki-67.

增殖增殖物

活性染料

死细胞排除

表2。人民崇拜TM值白细胞试剂盒中的单位含物。

如要详细了解persistencetTM值试剂盒或我们其他的流式流式细胞细胞,以将其纳入您的临床前学杂志研究,并了解有关我们广泛流式细胞的术术,请与科文斯的科学家联系。

请注意,没有动物管理和使用均根据动物福利法律在Aaalac认可的中,研究中心驾驶,并经过iacuc协议和批准。


1歌DG,你们问,Carpenito C,普桑,王LP,霁C, Figini M、June CH、Coukos G、Powell DJ Jr. 通过CD137 (4-1BB)的共刺激信号传导增强CAR工程化T细胞的体内持续存在性、肿瘤定位和抗肿瘤活性。

癌症res。2011年7月1日; 71(13):4617-27。

2Maude Sl,Frey N,Shaw Pa,Aplenc R,Barrett Dm,Bunin NJ等人。NENGL J MED。N ENGL J MED。2014; 371(16):1507-17。

3.龙啊,哈索·瓦姆,瑞恩·杰夫,万豪班克,默尔佩米,ingaramo m等人。Nat Med .. Nat Med。2015; 21:581-90。

4.搬运工DL,Hwang Wt,Frey NV,Lacey SF,Shaw Pa,Loren Aw等人。综合抗原受体T.Sci翻译Sci Transper Med。2015; 7(303):303RA139。

5.Santomasso B,Bachier C,Westin J,Rezvani K,Shpall EJ。Car T细胞疗法的一篇:细胞细胞子释放综合,神经神经和经济负担

Am Soc Clin on incol教育书。2019年1月; 39:433-444。

6.Maus MV和6月Ch。为过继t细胞疗法制造更好的癌症.Clin癌症res。2016年4月15日;22(8):1875-1884。

7.Chmielewski M,Abken H.卡车:第四代car.expert alik biol ther。2015; 15(8):1145-54。


作者:

Mark J Cameron |科研总监

日期:

2020年11月

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