使用新型康普德™测试套组通过流式细胞术进行全面的树突状细胞分析

为了满足小鼠临床前模型中对稳健的全面直流免疫表型分析日益增长的需求,科文斯配置了一个新的标准测试套组康普德™。在这篇技术文章中,我们将演示如何使用此测试套组分析肿瘤和其他组织来源的细胞样品中的各种直流亚组。

作者:

大卫德雷珀博士 | 科研助理总监

日期:

2019年2月

T型细胞介导的抗肿瘤反应取决于呈递肿瘤相关抗原(塔阿)并向T型细胞提供共刺激信号的抗原呈递细胞(APC公司)的活性。这转而激活了肿瘤特异性T型细胞,触发了这些细胞的扩增和趋化,使其发挥作用。树突状细胞((直流)是在此过程中发挥重要作用的专门APC.DC公司可以被激活以表达大量的共刺激配体,并使抗原内在化并向CD4细胞+和CD8型+T型细胞呈递免疫显性肽。利用直流功能的新型疗法的研发是一个得到深入研究的领域。为了促进这些研究并满足对小鼠临床前模型中稳健的全面直流免疫表型分析日益增长的需求,科文斯配置了一个新的标准测试套组康普德™。在这篇技术文章中,我们将演示如何使用此测试套组分析肿瘤和其他组织来源的细胞样品中的各种直流亚组。

有关不精情不达亚麻及其生物学功能的一般性,请请我们最近发放的博客“有关树突状细胞生物学和使用同源免疫肿瘤模型进行分析的简介”

康普德™测试套组使研究人员能够确定体内治疗是影响肿瘤,引流淋巴结(ln)或其他组织室中不断Dc亚麻的丰度和激活状态。这是一个种结了。它是一个状态状态组抗体的12色测试,这些抗体在经过适当检查后可描绘出不成的DC亚麻,并提供有关DC T细胞细胞活(表1)的深度见解。通行精心设计的设门,该测试套组首先通知排除门巨噬细胞,粒细胞和b细胞,从而提高直流分享的精选。此过程浩大声地区降低了由于不相关或自体色光细胞细胞而造成dc分类受到影响表险描述然后群表表。按照CD11C和II类MHC由中到高于达的水平水平分享分享。这些这些DC包括CD103+/CD8型+DC1型亚群和CD11b细胞+DC2型亚群(图1A)其经过证明可以驱动CD8型+和CD4细胞+t细胞抗肿瘤反应。[1]XCR1型表达被多个小组记录为具有交叉呈递活性的直流标记物,直流是CD8型+T型细胞的直流介导活化所需的表型。[2]图1b和1c展示b16-f10肿瘤来到的细胞和引流闻的xcr1+直流分析。如图所示,XCR1型表达式通常与DC1型亚群相关。最后,测量成熟标记物CD80型和CD86型的表达以评估直流的T型细胞共刺激潜力。图1天显示在B16-F10型黑色素瘤肿瘤中这些标记物在直流上的表达水平相对较低,表明肿瘤微环境((TME)赋予直流的免疫抑制作用。

抗体/染料 描述
CD45细胞 泛免疫细胞标记物

F4 / 80,LY-6G,CD19

巨噬细胞、粒细胞和B类细胞排除门
CD11c细胞 树突状细胞标记物
CD24型 树突状细胞标记物
CD8. DC1含物
MHC II型类 树突状细胞标记物/成熟标记物
CD103型 DC1含物
CD11b细胞 DC2杂物
XCR1型 交叉呈递/迁移树突状细胞细胞物
CD80型 成熟标记物
CD86型 成熟标记物
活性染料 死细胞排除
通过分别替换Ly-6C/CD206型和Siglec-H公司抗体,可以定制康普德™以分析炎性直流电(InfDC)和浆细胞样直流亚群。

图1:使用MI-COMPDC™测试测试分类DC亚洲。
图1:使用康普德™测试套组分析直流亚群。B16-F10型黑素瘤肿瘤来自小鼠。肿瘤来源细胞((一)中的DC1型和DC2型亚群分析、肿瘤(B) CD103+DC1型细胞中的XCR1型表达和来自B16-F10型荷瘤小鼠((三)的淋巴结(LN)共刺激标记物CD80型和CD86型在全部肿瘤来源直流中的表达(D) 是的红色峰代表靶标染色的细胞。蓝色峰代表未染色的阴性对照。

Compdc™还可以定制以群别两个dc亚洲。其中包括炎症性dc(infdc),可通过过替代抗cd206和抗ly -6c繁体来构成。+MHCII公司+CD11b细胞+CD206型+细胞的形式从单核细胞细胞细胞抑制(mdsc)门中划出(图2a)。[3]浆细胞样直流(pDC)也可以通过替代抗Siglec-H公司抗体来定量测量。虽然TME公司中的复合片功能尚未完全表征,但许多报告表明这些复合片可能功能受损,甚至可以对抗肿瘤反应产生免疫抑制作用。[4]复合片通常具有低水平的CD11c细胞表达,并且对Siglec-H公司呈阳性,如图2B级所示。

图2:通过定制康普德™测试套组实现对infDC公司和复合片亚群的分析。 (A) B16-F10型肿瘤来源细胞的infDC公司分析。 (B) CT26型大肠癌肿瘤来源细胞的复合片分析。
图2:通过定制康普德™测试套组实现对infDC公司和复合片亚群的分析。(A) B16-F10型肿瘤来源细胞的infDC公司分析。(B) CT26型大肠癌肿瘤来源细胞的复合片分析。

如要详细了解康普德™测试套组以及如何将其纳入您的研究,请联系科科诗科学家

1加德纳,A。和拉斐尔,B(2016)。树突状细胞与癌症免疫。免疫学趋势,37(12), 855-865。

2Wylie,B.、Seppanen,E.、Xiao,K.、Zemek,R.、Zanker,D.、Prato,S…和韦特曼,J(2015)。迁移性XCR1+CD103型−和XCR1+CD103型+树突状细胞对皮肤黑色素瘤抗原的交叉呈递。 《肿瘤免疫学》,4(8),E1019198。

Kuhn,S.、Yang,J。和朗切斯,F(2015)。单核细胞衍生的树突状细胞对于局部免疫治疗后的CD8+T型细胞活化和抗肿瘤反应至关重要。免疫学中的边疆,6584。

4Mitchell,D.、Chintala,S。和戴伊,M(2018)。免疫和癌症领域的浆细胞样树突状细胞。 《神经免疫学杂志》。



注意:研根据使用的是使用的动物福利法律在Aaalac认可的中的中心行为的