深入研研肿瘤的t细胞表型

在这篇技术文章中,我们通过展示使用新的扩大CompT™测试套组(一种16色测试套组)生成的数据来演示后者的功能,该测试套组将T细胞激活和分化的流动分析提高到超过科文斯服务组合中其他任何测试套组的水平。

作者:

David Draper博士 | 科研助理总监

日期:

2019年8月

使用大胆繁体综合性的流式细胞仪仪细胞仪细胞细胞仪细胞细胞仪群的优势。当当全面的数码集,但可用分类的含有有限时,可用分类为重要。另一种,有大量繁体的试剂组也可以用力更多个亚洲传行深入的免疫免疫分享,甚至可以对单位亚洲传播更深入的分享。在这这技术文科中,我们通过通讯展示使用新的扩大的compt™测试套组(一种16色测试套组)生成的数码来演示后者的功能,该测试套组将t细胞和分解的流激活高到超过科文学的流量分子。

扩展型compt™试剂组以compt™试剂组为基因,后者是我们最受欢迎的标准,可用于检测cd4+和CD8+T细胞。经过改进的试剂组增加了效应子和记忆T细胞标记物,此外还有用于分析T细胞活化和衰竭的四个其他标记物。表1描述了扩展型CompT™试剂组的组成,并使用未经治疗的鼠C38结肠腺癌(图1)说明了其设门和分析策略。

繁体/染料 描述
CD45 泛免疫泛免疫细胞物
CD3 泛t细胞含物
CD4 CD4 + T细胞含物
CD8 CD8 + T细胞含物
FoxP3 调节性t细胞含物
CD25 调节性T细胞含物/ IL-2繁体
CD44 活化/记忆含物
CD62L 幼稚T细胞/记忆标记物
ki-67. 增殖增殖物
CD69 T细胞活化标记物
PD-1 T细胞活化/衰竭标记物
LAG-3 T细胞活化/衰竭标记物
蒂姆3. T细胞衰竭标记物
ICOS. T细胞活化标记物
粒酶B 抗肿瘤细胞毒性含物
活性染料 死细胞排除
扩展型Compt™可传单定制,以纳入nk / nkt细胞含物(CD49b / cd335),以以粒酶b和致锰矿在这些亚群中达达。


与销有科文斯t细胞试剂组一流,分享到排除死细胞开放,随后随后行CD45+免疫细胞划定以圈选cd3+t细胞(未显示)。图1a显示了cd4+和CD8+t细胞分享在Compt™和扩展型ompt™试剂组之间的下降。其中包括cd69和pd-1,两者会在t细胞活活后上。[1]另一个共同的终点是CD8+T细胞增殖,通过使用ki-67表达作为替代,检测cd4+t细胞以销量辅助性t细胞和调节性细胞(tregs)。图1b和1c说明了用水在Compt™试剂组基础上行行程的新闻终点,下文将对这些终点行行程。

图1:使用扩展型Compt™试剂组分类T细胞
图1:使用扩展型Compt™试剂组分类T.(a)CD4 +辅助细胞,CD8 + T细胞和Treg送量,包括对增殖的量(Ki-67分钟)和CD69 / PD-1标记达达达达达。(b)效应子/记忆cd8 + t细胞分子,以量化幼稚,teff,tem和tcm亚麻。(c)对于t细胞含化/衰竭料的扩展料B.红色峰代表靶标染色的。蓝色峰蓝色峰代表未染色的阴性。


效应子和记忆cd8+t细胞分解的分类图1b所示.t细胞向记忆表型的转气在感染和癌症发产机理学背景对批发产物背景应答关键重要.cd44和cd62l分享重要。四四分化状态。其中包括幼稚或灭活t细胞,活化效应子t细胞(teff),效应效应(tem)和中间记忆(tcm)亚洲和中医亚麻可以循环,但分类倾向于于非淋巴和淋巴组织中。[2]近期的报告表明,这两个亚群在抗肿瘤反应中具有不同的作用。最近,第三种常驻记忆(Trm)种群据称在各模型中均在控制肿瘤生长方面发挥着重要作用,并可使用CD103以及其他标记物来描述。[3]扩展型Compt™试剂组可定制纳入trm细胞分享。

扩展型Compt™试剂组包括ICOS,LAG-3,TIM-3和粒酶B分类,这是针对t细胞得到得到深入研四生物物种(图1c)。单独或含有了解CD8+ T细胞的抗肿瘤抗肿瘤抗肿瘤力。[4]粒酶译为ICOS作用,因此译为有力的,因此icos成型,因此使icos为吸引靶标。[4]生物含有,并且并且cd8 + t细胞的相关。相反,pd-1,lag-3和tim-3是抑制性受体,尽管尽管三种繁体的表达与t细胞衰竭有关,但越来源多的数码说明,表达衰竭pd-1的cd8 + t细胞中间的亚洲之间的异质性。[5]这这种异质性与这些这些抑制抑制模式模式模式相相此可帮助帮助具体而不倾向力的不成话,这些子胸壁有的东西,[6]图2说明了细胞增殖和/或裂解细胞的独独和/或裂解细胞的独独和/或裂解细胞潜ー潜ー潜的细胞,并深入剖析了表达细胞亚洲的异质pd-1及其功能。多重其他t细胞活活已已得到,并会包括包括。其中包括tigit,ox-40,CD137,CTLA-4等。科文有具备的繁体肿瘤分类中分量多重种类标记物的经验。只需开放极少的批发工作,即可对扩展型uppt™进行,以以您独特的临床前需求。

未经治疗的MC38肿瘤衍生的细胞中T细胞活化/衰竭标记物的多重分析。
图2:未经治疗的MC38肿瘤衍生的细胞中T细胞活化/衰竭标记物的多重分析。扩展型CompT™试剂组可同时测量多种T细胞生物标记物在衰竭和抗肿瘤活性方面的共表达。本例中,首先对PD1+ CD8+ T细胞进行了圈选。然后,下游分析定量具有PD-1、LAG-3和TIM-3双重和三重阳性表达的细胞。


科文斯可以使用多达18种颜色配置自定义试剂组,这将为MI扩展型CompT™试剂组创建方案。除了如上节所述替换或添加不同的T细胞活化/衰竭标记物外,NK/NKT细胞分析也是有价值的潜在终点。这可通过在试剂组中添加CD49b/CD335标记物实现(图3)。

图3:扩展型compt™试剂组定制可实现未经治疗的mc38肿瘤衍生细胞中间nk和nkt细胞细胞描述cd49b / cd335 + nk细胞和nkt细胞。通讯下载分量定亚洲中的粒酶B达达水平。
图3:扩展型Compt™试剂试剂可实现未经治疗的MC38肿瘤衍生细胞中间NK和NKT细胞亚群的分别.CD3达达用于描述CD49B / CD335 + NK细胞和NKT细胞。通讯下载分类亚洲中的粒酶B达达水平。

NK和NKT细胞是IFNγ的重要来源,对增强CD8+ T细胞的抗肿瘤反应具有间接作用,并可通过释放细胞溶性颗粒(如粒酶B)直接裂解肿瘤细胞。[7,8]其他选择包括IFNγ、TNFα或其他细胞因子分析,以对PD1+和PD1- CD8+ T细胞进行更深入的分析。也可增加CD103分析以检测常驻记忆T细胞,从而更深入地了解肿瘤中的记忆T细胞特征。科文斯的团队在研发定制流式细胞仪服务方面拥有丰富的经验。如要详细了解如何将扩展型CompT™试剂组整合到您的临床前研究中,请与科文斯的科学家联系。

1江,y。,y。李和B.朱。“肿瘤微环境中的t细胞。”细胞死亡与疾病6..6 (2015): e1792。

2Klebanoff、Christopher A.、Luca Gattinoni和Nicholas P. Restifo。“CD8+ T细胞记忆在肿瘤免疫学和免疫治疗中的应用。”免疫学检查211.1 (2006): 214-224

3.妈咪·乔布,Fathia等人。“常驻记忆t细胞是肿瘤免疫学中的重要成部分。”癌症免疫疗程6..1 (2018): 87。

4.Amatore,Florent,Laurent Gorvel和Daniel Olive。“诱导协同刺激物(ICOS)作用于抗癌治疗。”关键词的专家意见22.4(2018):343-351。

5.Miller,Brian C.等人。“衰竭CD8+T细胞亚洲介导肿瘤控制并响应阻断。”自然医学》 20.3 (2019): 326。

6.熊,汇忠等人。“在小鼠同源肿瘤模型中间表达活达和功能性cd8 + t细胞的繁体。”Cancer Immunology Research7.6(2019):963-976。

7.Zhu、Yanting、Bo Huang和Jue Shi。"Fas配体和裂解颗粒差异性地控制天然杀伤细胞针对癌症靶标的细胞毒性动力学。"onCotarget.7.30(2016):47163。

8.赵,杰等人。“II叶多克隆自己杀伤性需要plzf和sap才能产和促进cpg介导的。”美国国家科学生院刊》 111.7 (2014): 2674-2679。

注意:研究是根据适用的动物福利法规在AAALAC认可的研究中心进行的