经合组织231：内分泌干扰筛查程序 - 两栖动物变态测定

作者：

Sarah Broadley，BSC（荣誉），MSC，PGCE，研究科学家四，专业病理学服务;Catherine Ross博士，DVM，MSC，MRCVS，病理学家，病理科医学系，英国哈罗盖特

日期：

1月2021年

介绍

'内分泌破坏器是改变内分泌系统的功能的外源性物质或混合物，从而导致完整生物体或其后代或（次）群体中的不良健康影响WHO-ICPS，2002年。

担心环境化学品可能对人类和野生动物产生不利影响，经合组织发起了一个高优先级活动，以修改和制定筛选和测试潜在内分泌干扰者的指导。试验包括在啮齿动物（测试指南407）和两栖变态测定中的28天重复剂量测试和两栖变态测定（AMA测试指南231）的增强。

'内分泌破坏器是改变内分泌系统的功能的外源性物质或混合物，从而导致完整生物体或其后代或（次）群体中的不良健康影响WHO-ICPS，2002年。

担心环境化学品可能对人类和野生动物产生不利影响，经合组织发起了一个高优先级活动，以修改和制定筛选和测试潜在内分泌干扰者的指导。试验包括在啮齿动物（测试指南407）和两栖变态测定中的28天重复剂量测试和两栖变态测定（AMA测试指南231）的增强。

法规

2018年，经合组织发布了一个修订的概念框架，用于检测和评估内分泌扰乱化学品。概念框架由五个级别的测试组成，旨在用作工具箱。

1级 -基于现有信息进行排序和优先级。

2级 -体外测定提供机械数据。

第3级 -在体内测定中提供有关所选内分泌机制和效果的数据。

4级 -在体内测定中，为内分泌机制提供有关不利影响的数据。

5级 -在体内测定中，提供了内分泌和其他机制的综合数据。

两栖动物变态测定与鱼短期繁殖测定，子宫繁殖测定和Hershbergers测定相同

目前，除非要求这样做，否则欧盟没有法定要求使用特定的内分交中中断的测试。

然而，在美国。然而，测试是强制性的，美国EPA制定了双重策略。

第1级测定 -在体外和体内测定中的选择。两栖变态测定和鱼短期繁殖测定落入这一系列测试。

第2层测定 -体内顶端测定，包括哺乳动物2代毒性，两栖生长/繁殖，AVIAN 2代，鱼2代和Mysid 2代。

两栖动物变态测定

材料和方法

两栖变态测定（AMA）是旨在经验鉴定可能干扰下丘脑 - 垂体 - 甲状腺（HPT）轴的正常功能的物质的筛选测定。它提供了一种良好的研究，甲状腺依赖性过程，响应HPT轴内有源的物质，并且是唯一的现有测定检测在经历形态发育的动物中的甲状腺活性。

测试设计涉及暴露第51阶段Xenopus laevis.蝌蚪至少三种不同浓度的测试化学品和水控制21天。幼虫密度为每次试验箱20蝌蚪。

第7天测量

在随机和人道安乐死的情况下选择五个蝌蚪。它们被冲洗，呈衬色的干燥和体重确定。每个蝌蚪确定后肢，鼻塞通风长度和发育阶段。

第21天测量

剩余的蝌蚪从测试罐中取出并人道地安乐死。它们被冲洗，呈衬色的干燥和体重确定。每个蝌蚪确定后肢，鼻塞通风长度和发育阶段。

作为整个样品或修剪的头部样品，将蝌蚪放在Davidson的固定剂中48至72小时，包括下颌。

每罐的五个蝌蚪评估组织病理学。

组织学准备

组织修剪- 整个头部被加工成石蜡蜡。

嵌入 -头部嵌入水平平面（纵向（LS）呈现）上的腹侧腹部或面向下的部分（横向（TS）呈现）。

microtomy -通过甲状腺拍摄五个步骤，并用Haematoxylin和eosin染色

组织病理学

诊断标准包括：甲状腺润肤症/萎缩滤泡细胞肥大滤泡细胞增生

毛囊区域/胶体质量和滤泡电池高度/形状

图1.甲状腺（箭头），纵向截面，X2放大率。

图2.甲状腺（箭头）。x10放大倍数。条=50μm。

图3.甲状腺（箭头），横截面，X2放大率。

图4.甲状腺（箭头），横截面，X10放大。酒吧=100μm。

结果

在没有发育效应的情况下，已经证明了对甲状腺组织学的影响。如果在甲状腺中看到组织病理学变化，则认为它被认为是活性的。如果没有看到发育延迟和没有组织病理学变化，则将化学物质被认为是甲状腺无活性。这是因为甲状腺受到甲状腺刺激激素（TSH）的影响，并且任何改变甲状腺激素的任何化学物质都会充分改变TSH分泌将导致甲状腺细胞病理学变化。

参考

经合组织（2018年），关于评估内分泌干扰化学品的标准测试指南，经合组织检测和评估，经合组织发布，巴黎的标准化试验指南的指导案件150。https://doi.org/10.1787/9789264304741-

经合组织（2009），试验No.231：Amphibian变态测定，经合组织化学品测试指南，第2节，OECD出版，巴黎，HTTPS：//doi.org/10.1787/9789264076242.