经合组织231：内分泌干扰筛查程序 - 两栖动物变态测定

執筆者：

Sarah Broadley，BSC（荣誉），MSC，PGCE，研究科学家四，专业病理学服务;Catherine Ross博士，DVM，MSC，MRCVS，病理学家，病理科医学系，英国哈罗盖特

日付：

2021年1月

はじめに

'内分泌破坏器是改变内分泌系统的功能的外源性物质或混合物，从而导致完整生物体或其后代或（次）群体中的不良健康影响WHO-ICPS, 2002年。

由于担心环境化学物质可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，以修订和开发指南，以筛选和测试潜在的内分泌干扰物。试验包括加强啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变态试验(AMA试验指南231)。

'内分泌破坏器是改变内分泌系统的功能的外源性物质或混合物，从而导致完整生物体或其后代或（次）群体中的不良健康影响WHO-ICPS, 2002年。

由于担心环境化学物质可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，以修订和开发指南，以筛选和测试潜在的内分泌干扰物。试验包括加强啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变态试验(AMA试验指南231)。

規制

2018年，经合组织发布了修订后的《内分泌干扰物检测和评估概念框架》。概念框架包括五个级别的测试，被设计为一个工具箱。

1级 -基于现有信息进行排序和优先级。

2级 -体外测定提供机械数据。

第3级 -在体内测定中提供有关所选内分泌机制和效果的数据。

4级 -在体内测定中，为内分泌机制提供有关不利影响的数据。

5级 -体内分析为内分泌和其他机制的影响提供了全面的数据。

两栖动物变态试验与鱼类短期繁殖试验、子宫营养试验和赫什伯格试验一样属于第三级

目前，除非要求这样做，否则欧盟没有法定要求使用特定的内分交中中断的测试。

然而，在美国。然而，测试是强制性的，美国EPA制定了双重策略。

第1级测定 -在体外和体内测定中的选择。两栖变态测定和鱼短期繁殖测定落入这一系列测试。

第2层测定 -包括哺乳动物2代毒性、两栖动物生长繁殖、鸟类2代、鱼类2代和Mysid 2代。

两栖动物变形分析

材料和方法

两栖类变态试验(AMA)是一种筛选试验，旨在通过经验识别可能干扰下丘脑-垂体-甲状腺(HPT)轴正常功能的物质。它提供了一个经过充分研究的、甲状腺依赖的过程，该过程对HPT轴内活性物质作出反应，而且它是目前唯一一种检测正在经历形态发育的动物中甲状腺活性的方法。

测试设计涉及暴露第51阶段非洲爪蟾蜍光滑的对蝌蚪进行最少三种不同浓度的化学测试和水控制21天。幼虫密度为每个测试池20只蝌蚪。

第7天测量

5只蝌蚪被随机选择，并被人道地安乐死。他们被冲洗，吸干和体重测定。确定了每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

第21天测量

剩下的蝌蚪从测试池中取出并被人道地安乐死。他们被冲洗，吸干和体重测定。确定了每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

作为整个样品或修剪的头部样品，将蝌蚪放在Davidson的固定剂中48至72小时，包括下颌。

每罐的五个蝌蚪评估组织病理学。

组织学准备

组织修剪- 整个头部被加工成石蜡蜡。

嵌入 -头部嵌入水平平面（纵向（LS）呈现）上的腹侧腹部或面向下的部分（横向（TS）呈现）。

microtomy -通过甲状腺拍摄五个步骤，并用Haematoxylin和eosin染色

施工学学

诊断标准包括:甲状腺肥大/萎缩滤泡细胞肥大滤泡细胞增生

毛囊区域/胶体质量和滤泡电池高度/形状

图1.甲状腺（箭头），纵向截面，X2放大率。

图2。甲状腺(箭头)。x10放大。Bar = 50µm。

图3。甲状腺(箭头)，横切面，x2放大倍数。

图4.甲状腺（箭头），横截面，X10放大。酒吧=100μm。

结果

对甲状腺组织学的影响已被证明在没有发育影响。如果在甲状腺中看到组织病理变化，则认为是活跃的。如果没有发育迟缓和组织病理学变化被认为是甲状腺活性化学物。这是因为甲状腺受到促甲状腺激素(TSH)的影响，任何足以改变循环中的甲状腺激素从而改变TSH分泌的化学物质都会导致甲状腺的组织病理学改变。

参照

经合组织(2018)，《评估化学品内分泌干扰的标准化测试指南修订指南文件150》，经合组织测试和评估系列，经合组织出版，巴黎。https://doi.org/10.1787/9789264304741-en

经合组织（2009），试验No.231：Amphibian变态测定，经合组织化学品测试指南，第2节，OECD出版，巴黎，HTTPS：//doi.org/10.1787/9789264076242.