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对临床前使用hPBMC的更新yaboapp体育官网免疫肿瘤模型
作者：
谢里·巴恩斯博士
日期:
2020年七月
今年二月，我们提出了利用人外周血单个核细胞Covance的新兴人性化鼠标平台的初始数据(hPBMC)移植。
我们的数据使用点。cg -Prkdcscid Il2rgtm1Wjl在SzJ (NSG)小鼠中，我们发现了4个hPBMC供体，在hPBMC注射后至少有30天的治疗时间，一致的T细胞移植，以及两种人类异种移植模型，MiaPaCa-2(胰腺)和A549 (NSCLC)的生长hPBMC-engrafted NSG的老鼠。
我们现在本初始功效数据，表明在用pembrolizumab（Keytruda®，抗HPD-1）治疗用途hPBMC-移入的NSG小鼠轴承的MiaPaCa-2或A549人异种移植物的。
实验设计
这些研究的目的是评估pembrolizumab对MiaPaCa-2或A549人肿瘤模型在NSG小鼠移植hPBMCs后的抗肿瘤反应。动物的护理和使用是按照美国科学促进会认证的实验室动物护理和使用指南进行的。
NSG小鼠（杰克逊实验室，巴港缅因州，美国，应变＃0005557）静脉从肿瘤一旦建立成了三种不同正常健康供体（Hemacare，洛杉矶CA，USA）给予hPBMCs（〜105-118mm3)。pembrolizumab治疗在注射hPBMC后的第二天开始。对pembrolizumab的应答，评估移植物抗宿主病(Graft vs. Host Disease, GvHD)的发病特征，在两个时间点采集全血，流式细胞术分析人淋巴细胞标记物，以确定供体移植的是CD45+细胞，包括CD4+和CD8+ T细胞。
MiaPaCa-2和A549可以控制植入hPBMC小鼠的肿瘤生长
未给予治疗的对照组MiaPaCa-2肿瘤倍增时间(Td)为~7天，每组给予hPBMCs的肿瘤倍增时间为~5 ~7天。
肿瘤均匀地生长至平均肿瘤体积1000-1200mm的3通过在所有3个供36天，然而，一些群体内和群体间的差异被认为超越千毫米前一天36肿瘤生长3并没有受到移植hPBMCs的影响(图1)。
这些结果表明任何这些三个供体是利用将是适合的MiaPaCa-2的功效研究与时间1000毫米的尺寸评估（TES）3。
A549 Td的在未处理的对照动物为〜11天，Td的动物施用hPBMCs从横跨每个供体基团9至12天不等。
肿瘤与hPBMCs均匀长大从供体1和3至平均肿瘤体积1000-1200mm的3在第40天之后会有一些变化。
组内变异在含有A549肿瘤和来自供体2的hPBMCs的小鼠中最为明显(图2)。
这些结果表明供体1和供体3是最适合的A549与千毫米的TES有效性研究3。
移植和人淋巴细胞的持久性
植入评估在第28天，并通过在从研究小鼠外周血人免疫细胞标记的免疫表型分析hPBMC施用后一天或者38（的MiaPaCa-2）或第42天（A549）。
流式细胞仪检测标志物包括mCD45，hCD45，hCD3，HCD4和hCD8。人CD45 +细胞，活细胞的动物携带的MiaPaCa任-2（图3A）或A549肿瘤（图3B）的百分比，现介绍如下并用作hPBMC植入的指标。
我们发现，在这两个时间点，所有献血者的全血中都检测到了hCD45+细胞，这与已发表的文献一致。1
而组内变异性是明显的，植入的平均程度仍然是一致的或第一和第二时间点之间的增加。这也似乎hPBMCs移植到动物体内携带A549肿瘤明显高于嫁接到动物体内携带的MiaPaCa-2肿瘤稍高，这是我们最初的模型开发的数据是一致的。
在这个时候，它是未知这是否是正常的学习，以学习变异或是否有一个模型依赖于移植的结果。
图4示出在全血中的CD4 +和CD8 + T细胞的分布的一个例子并且示出了T细胞的分布的时间点之间是一致的。
虽然这些数据仅代表了含有MiaPaCa-2肿瘤的小鼠中的供体1，但在供体和模型测试中也报告了类似的数据。
具体来说，CD4+和CD8+ T细胞的分布在携带miapaca -2的小鼠中分别为42-65%和32-46%，在携带a549的小鼠中分别为51-67%和22-44%(数据未显示)。
的的GvHD症状的发作是通过体重和临床观察监测;虽然没有在这些研究病理证实，在这些模型中观察到的症状强烈与疾病相关2与以前的数据（数据未显示）。
应对Pembrolizumab
有趣的是，在hPBMC-移入的小鼠pembrolizumab治疗不与任何测试（图5和6）中的条件下的供体的影响的MiaPaCa-2或A549肿瘤的生长。
在本文的时候，有文献的关于在体内响应于pembrolizumab在hPBMC-嫁接的人源化的小鼠携带的MiaPaCa-2肿瘤很少。
尽管如此，我们的数据反映了关于胰腺肿瘤对免疫肿瘤制剂的难治性的广泛文献。3对A549出现pembrolizumab的反应温和如先前报道，这反应似乎是捐助依赖。4
尽管缺乏一致对A549或的MiaPaCa-2 pembrolizumab的响应，这些模型可以证明使用抗HPD-1合理组合战略，有改善和改变横跨不同捐赠者的响应评估显著室治疗方法有用。
给NSG小鼠hPBMCs导致小鼠体内的人T细胞持续存在，对MiaPaCa-2或A549肿瘤的生长影响极小。这种方法是一个功能强大的平台，临床前研究新的人类药剂线束人T淋巴细胞直接yaboapp体育官网与直接的临床意义的抗肿瘤活性的影响。
未来的工作将通过流式细胞术证明在肿瘤和周围的人T细胞的浸润与治疗经FDA批准针对与hPBMCs重构于NSG小鼠人类肿瘤异种移植物的免疫疗法。
科文斯已经存入银行，这些人PBMC供体的物资可用于您的研究需求。请联系我们的临床前肿瘤学科yaboapp体育官网学家看看hpbmc移植的NSG小鼠可以用于你的下一次翻译immuno-oncology研究。
参考文献：
1。托德·皮尔逊，戴尔L.格雷纳和Leonard D.舒尔茨。“人性化”小鼠研究人体免疫力的创新。2008 CURR Protoc免疫学第15章：单位15.21
2。新浪Naserian，马修勒克莱尔，艾伦Thiolat，卡罗琳皮隆，辛迪勒布雷，耶齐德Belkacemi，塞巴斯蒂安·莫里，弗雷德里克夏洛特和何塞L.科恩。操作简单，重复性，高效的临床分级系统急性移植物抗宿主病的小鼠模型。2018年接待。在与免疫。（9）：10。
3。罗伯特·托菲，朱玉文，理查德·舒立克。胰腺癌的免疫治疗:障碍和突破。2018.安肠胃炎外科杂志2(4):274-281。
4。Shouheng林，国华黄林成，李震，蒋以任晓，秋华邓裕川江，百亨立，死苗林，苏娜王，其亭武，慧慧瑶，苏曹扬力，澎刘，魏巍，杜安基宁·比，妖妖，浙省文，徐朝张，仪陇武，贞丰张，蜀中崔，孙小芳，杨学明钱，和李鹏。外周血单核细胞衍生的人源化肺癌小鼠模型用于研究PD-L1 / PD-1靶向免疫治疗的效力的建立。2018年单克隆抗体。10（8）：1301至11年。