流式细胞术检测实体肿瘤中的磷蛋白

在这篇文章中，我们将介绍使用磷酸流式细胞术检测实体肿瘤中的磷酸化蛋白，并综述了cabozantinib对肿瘤与宿主免疫细胞中PI3K/AKT和JAK-STAT信号通路抑制的分析。

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这在活的有机体内通过测量药物靶标的途径内的细胞信号传导蛋白的磷酸化状态来评估小分子抑制剂的疗效。当需要对实体瘤的分析时，这可能是挑战。在利用啮齿动物模型的临床前研究中，肿瘤分析最常见的方法是免疫印刷和基于ELISA的技术。然而，这些批量分析方法具有两个主要缺点。它们同时测量多个目标的相对能力是次优。更重要的是，它们无法分析异质肿瘤样本内的多个不同亚群中的靶标。当目标信令蛋白在肿瘤微环境中的不同细胞类型中的相反功能如免疫细胞与肿瘤细胞中时，这可能是重要的，如果药物诱导的效果在一个但不是两个子集中发生的，则甚至临时。

Labcorp开发了一部小说phospho-flow-based平台它同时分析宿主免疫细胞和实体肿瘤中肿瘤细胞间隔中的多个细胞信号靶点。这是在磷酸化蛋白分析之前，通过对全造血细胞标记物CD45的免疫表型来区分肿瘤细胞和浸润的宿主免疫细胞。为了证明该平台的实用性，我们在皮下注射了FLT3抑制剂cabozantinib的小鼠体内检测了磷酸化STAT5和AKT下游靶点(S6)的水平。图1显示，cabozantinib降低了人类(h)CD45+肿瘤细胞中pS6和pSTAT5的水平。在小鼠(m)CD45+宿主免疫细胞(未显示)中，未观察到这些磷酸化蛋白水平的变化。因此，我们对PI3K/AKT和JAK-STAT信号活性有了深入的了解，它们是调节肿瘤生长和宿主免疫的已知途径，也是治疗干预的诱人靶点。

图1:实体瘤中STAT5和MAPK信号通路的磷酸化流分析。

MV-4-11是急性髓系白血病(AML)的一个模型，这是一种由几个基因中的一个基因突变驱动的恶性肿瘤。最常见的事件发生在FLT3基因中，该基因导致一个组成性活性的FLT3蛋白，通过触发PI3K/AKT和JAK-STAT信号的过度激活来驱动癌细胞增殖。¹Cabozantib介导的FLT3抑制已经证明抑制MV-4-11肿瘤生长在活的有机体内，与抑制AKT和统计信令相关联体外。²虽然过度活跃的PI3K / AKT和JAK-STAT5信号传导令人充分地记录在许多模型中驱动肿瘤生长，但是T细胞活化也需要这些信号蛋白的活性和存储器T细胞形成的产生。^3,4,5.这种二分法强调了能够同时分析实体肿瘤来源的免疫细胞和肿瘤细胞中的磷酸化蛋白的重要性。

Labcorp的肿瘤磷酸流动具有推导电池信号场的潜力。在肺和腹膜肿瘤中，2010年描述了固体组织磷流。^6.由于其他成功方法的报道稀缺。最近，将定义过分抑制的方法与细胞测定法配对，并成功地用于测量上皮样品中的磷蛋白，以及后续结直肠肿瘤^.7,8应当注意，这些方法需要在组织收获后固定，这可以改变由用于免疫蛋白酶型和信号分析的荧光抗体结合的表位。这可以限制技术提供的数据量。在免疫染色之前，Labcorp的固体肿瘤磷酸流动不需要固定。这有助于我们针对分析的不同群体的能力。我们正在努力扩大我们的能力。正在进行的努力专注于开发新的实体肿瘤磷酸流动服务，使得能够同时分析特定T细胞亚群和肿瘤细胞的体内治疗诱导的效果。

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参考文献

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