elisa和荧光斑点法检测肿瘤抗原特异性免疫

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增强肿瘤抗原特异性反应是免疫治疗的预期结果。无论是通过急性增强抗肿瘤免疫还是形成长寿的免疫记忆，成功促进宿主适应性免疫反应的药物有更好的临床成功机会¹．虽然可以测量抗原特异性的许多测定，但其中许多具有限制，因为它们需要使用模型特异性试剂，转基因动物或细胞次集纯化步骤。Covance临yaboapp体育官网床前肿瘤通过ELISPOT / FluoroSpot分析提供了一种简单且实惠的解决方案。

ELISPOT和FluoroSpot使用Sandwich ELISA的技术来测量产生和释放可溶性目标的细胞的频率。商业套件可用于测量包括细胞因子，趋化因子，免疫球蛋白，生长因子等的目标。在Covance，我们提供单色酶联免疫点分析，对一个靶（ELISPOT）以及同时的多色荧光 - 基于多色荧光分析，同时为多达3个靶标的分析（含氟部分）。图1中示出了图1中示出了用于分析肿瘤特异性IFNγ和IL-4产生细胞的含氟分子程序的示意图。

图1：ELISPOT / FluoroSpot程序

在本技术聚焦中，我们使用Hepa1-6-luc小鼠肝癌模型(图2)演示了ELISpot/ fluorspot在临床前免疫肿瘤学研究中的应用(图2)。为此，我们使用fyaboapp体育官网luorspot检测了荷瘤小鼠外周血中的肿瘤特异性免疫，并表明在活的有机体内抗pd -1治疗的检查点抑制增加了产生IFNγ的循环肿瘤特异性细胞的数量。此外，抗pd -1使IFNγ/IL-4细胞因子从免疫抑制反应转变为更有利于炎症和抗肿瘤的信号。

图2：HEPA1-6-LUC肿瘤携带小鼠抗肿瘤免疫的含氟分子分析。C57BL / 6小鼠与已建立的HEPA1-6-LUC肿瘤进行抗PD-1或同种型对照抗体。用辐照的HEPA1-6-LUC细胞培养200μl外周血的白细胞。a）使用CTL免疫带S6通用分析仪定量IFNγ和IL-4分泌细胞的频率。b）对每只小鼠的IFNγ产生细胞频率对肿瘤体积的分析。C）。通过测量IFNγ/ IL-4产生细胞的比率评估每只鼠标的Th1 / Th2平衡。

类似于疫苗的作用机制，一种生长的肿瘤引发了一种适应性免疫应答，其由产生肿瘤特异性细胞的抗体和细胞因子组成¹．响应的质量可以通过检测IFNγ和IL-4来表征。IFNγ已被良好记录以通过通过细胞毒性增强T细胞介导的T细胞抑制肿瘤生长。相比之下，IL-4通过各种免疫抑制作用促进肿瘤生长。这种二分法通常被称为th1 / th2平衡²．如图2所示，抗pd -1增加了肿瘤应答细胞产生IFNγ的频率体外刺激。相反，IL-4产生细胞的频率没有明显增加，表明检查点抑制触发了抗肿瘤保护免疫的增强。为了支持这一观点，具有干扰素γ产生细胞频率最高的小鼠，其肿瘤体积最小。此外，抗pd -1增加了IFNγ/IL-4产生细胞的比例，这同样在肿瘤最小的小鼠中最为显著。

在一起，该数据集展示了ELISPOT / Fluorospot如何进一步揭示对肿瘤特异性免疫应答的药物影响。此外，因为可以用小体积的血液进行测定，所以ELISPOT /氟光口可以纵向施加效力臂。因此，提供了在不添加第二个采样臂的药物活动上获得机械洞察的机会的机会。有关ELISPOT / Fluorospot如何应用于您的临床前肿瘤和免疫肿瘤学研究的更多信息，请在Labcorp临床前肿瘤学中联系科学家。yaboapp体育官网

参考