Compentinar La PersistenciadeCélulasCar-T MedianteCitometríade Flujo

Durante laInvestigigaciónyeldesarrollopreclínicos，一个Menudo Se Investigan Las TerapiasdeCélulastCon汽车（接收DeAntígenosQuiméricos）Con Ratones Como Sujetos de Prueba。en Este Entorno，Los Ratores InmunocomprometicIDOS Llevan Una Carga Tumoral de Origen Humano Y SE LesAccepternancélulasCar-T HumanasAlogénicas。LasCélulasferningidasde Forma Adveriva儿子Dirigidas Por El受体DeAntígenosQuiméricosManipulado帕拉Uniantígenode superficie de Unacélula肿瘤（CD19，Por Ejethrea）。Como ResultAdo de laUnióndaCélulaTManipuladaALACÉLULA肿瘤，LACÉLULATSSEACTAy DRESTUYELASCÉLULAS肿瘤SIN RESTRICIONES DEL CMH。SE HACE UN SEGUIMIENTO DE LOS RATONERS enstudios deInvestigacaciónPRICLínicapara analizar variosparámetrospredefinidos que percen evercar eL crecimiento y la carga tumoral a fin dementinar la eficacia delascélulascar-t（Vea más información sobre cómo se puede determinar la eficacia mediante imagenología por bioluminiscencia (BLI)．

一个抗肿瘤的基本恢复因子células CAR-T是我们的时间点células CAR-T luego de su infusión en el huésped(持续)。总的来说，我们可以证明CAR-T对肿瘤的作用是有限的。¹En el entorno clínico, la remisión一个大型肿瘤患者广场hematológicas está ligada a la persistencia sostenida de células CAR-T。²Se cree la señalización de coestimuladores influye en la expansión y persistencia de las células T. Los estudios preclínicos调查la constructos de CAR manipulados para incluel dominio coestimulador 4-1BB Se han asoado con una persistencia prolongada de células CAR- t，una función efectora más lenta y sostenida y una mayor proporción de células T de memoria。^3.evaluation la persistencia de células CAR-T en estdios preclínicos influye en el éxito clínico。

Este artículo destacado sobre tecnología brindará información al lector sobre medición de la persistencia de células CAR-T mediante citometría de flujo durante la fase preclínica。

Modelos de ratones para la evaluación de candidates para células CAR-T

2017年九月，la Administración de Medicamentos y Alimentos aprobó la primera terapia con células CAR-T。La terapia celles es comercializada for Novartis y llama Kymriah。Kymriah también se conoce comotisagenlecleucelY FUE APROBADA PARANIÑOSY AstorianosJóvenesQue Ya No Responten A TerapiasEstándarpara la Leucemialinfoblásticaagudadecélulusb.LaTerapiaKymriahEstáBasadaen El Trabajo de Carl 6月，Phd en Ratones NSG^TMen La Universidad de Pensilvania。

埃尔拉点头。Cg -Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/SzJ，我认为这是一个很好的数字scid伽玛（NSG™），没有Expresa El GenPrkdc倪el创Il2rgx染色体ligado al chromosoma xscid(组合免疫缺陷)在proteína的完整免疫缺陷在reparación的完整免疫缺陷产生在células的完整免疫缺陷在其他免疫缺陷。Estos ratones no tienen células del sistema del complement ni células exterminadoras naturales (NK) y presentan an deficient ia en vías de señalización de citocinas。在人类免疫系统中，我们认为存在缺陷，包括células CAR-T。我们注射了一种人类肿瘤的扩增子método非常适合investigación preclínica de células CAR-T。

在我们都departamento de Oncología PreclínicaPodemos USAR Cualquier variedad de Ratures Comerciale Dixonies Para Estudios de Terapias ConCélulasCar-T Y Otros Estudios de Transferencia AdverivadeCélulas，包括Ratures NSG^TM，主要是冬虫夏草，冬虫夏草。

El面板PersistenceT^TMDelÁreaDeNcologíaPRINLínicaSE美国Para Personar Datos Longitudinales de PerslusciadeCélulasCar-T Y SE Puede Usar Con Tan Solo 5 Ul de Sangre Entea。Estádiseñadocomo eseanoo con protocalo de lisado / no lavado y Recuentos absolutos。EL Panel Tiene Flexibilidad Y Of Rece La Oportunidad de Agregar Sensices防CarEspecíficosen Los Canales Fitc，PE Y APC。一个洛杉矶Ratones NSG De Jackson实验室（Bar Harbour，缅因州，ee。uu。）selesserversó2x10⁷PBMC humanas, se les extrajo sangre 7, 14 y 21 días luego de la administración y se sometieron a la evaluación del panel PersistenceT^TM．

La Tabla 1描述LOS Reactivos Que Se Utilizan EN EL Panel Persistencet^TM．从图1开始，我们的门就开了。

表1:面板PersistenceT^TMDe antiuerpos y descripción De su uso。

Caracterización inmunofenotípica纵向de células CAR-T中位面板PersistenceT^TM

En elEntorno de oncología clínica，在expansión y persistencia de las células CAR-T se correlation on la respuesta and con conseguir la remisión en los patients。⁴特别重要的是，没有单独计算关于células CAR-T的有效性，sino también对seguridad en el entorno preclínico进行评估。Se aderten efunundarios grave en la terapia con células CAR-T y uno de los más importantes es el síndrome de liberación de citocinas (CRS)， que Se con la expansión de células CAR-T体内．⁵

El面板PersistenceT^TM直接适用于evaluación de cantiades de células CAR-T humanas en muestras extraídas de ratones a lo largo del timempo。我们必须要有这样的条件，我们可能要有这样的条件ratón我们必须有这样的条件través我们必须有这样的条件，我们必须有这样的条件。洛斯托纳斯说，我们可以进行larga研究duración对持久研究进行评估células CAR-T的形式específica。figura 2 muestra un ejemplo de cómo se puede us el panel PersistenceT^TMPara MedirLascélulasttumanasen Ratones nsg a lo largo del tiempo。

我的名字是células CAR-T

La PersistenciadeCélulasCar-T在Vivo Es un Marcador Secundario de la Eficaciaclínicaa largoplazo de la terapia concélulascar-t。Los estudios Han Demostrado QueCiertasCélulasCar-T Que Contienen联合国联合国多米尼欧洲Coestimulador CD28 Muestran Una Mayorexpresióndeceesreachionados conel aragotamientodecélululastt，que el Domio Coestimulador 4-1bb（tnfsf9）con la Misma EspecificidadAntiagénicarecotnica redujo el fenotipo agotnica regujo el fenotipo agotnica redujo el fenotipo Agotado．Esto Puede Ayudar A ExcexiCar PorQué，en EssayosClínicosde Pacientes Con LeucemiaLinfoblásticaAguda Refidivante O Fercortaria，SE Ha Informado Que LasCélulasCar-T Que Expresan联合国多米诺CD28 Persisten Hasta 3 Meses，Mientras Que LasCélululasCar-T Con Un Dominio4-1BB Persisten Hasti5Años，ymásde6米斯en Casi Todos Los Casos Que Se Pudieron Evaluar。⁶

Células CAR-T对上几代人的影响

Las células CAR-T siguen evolucionando mediante la modificación del receptor de antígenos quiméricos。Cada célula CAR-T tiene un scFv (fragmento Fv monocatenario variable)。该scFv是combinación de los dominios de la región变量de la cadena pesada (VH)和región变量de la cadena ligera (VL)。Un scFv es una proteína de fusión de la VH和VL de la免疫球蛋白，conecada Un péptido de enlace corto de entre 10 y 25 aminoácidos。

Los CAR de primera generación tienen un dominio de unión胞外，una región bisagra, un dominio de señalización胞内。Todas las células CAR- t tienen el dominio de cadena CD3 ζ para la señalización胞内y e主要传输器de señales de activación de células T. la incorporación de un dominio coestimulador (CD28 o 4-1BB) definió los CAR de segunda generación。我们的目标是proliferación de células T，我们的目标是secreción在体内的持续存在。

Los datos preclínicos muestran que Los CAR de tercera generación tienen una mejor función efectora y una persistencia in vivo más prolongada en comparación con Los CAR de segunda generación。Los CAR de tercera generación tienen varios dominios coestimuladores (CD28-41BB o CD28-OX40)。Las células CAR- t de cuarta generación a veces se denominan CAR“armados”y TRUCK (siglas en inglés de“células CAR- t redirigidas para la exterminación universal de citocinas”)。Las células CAR-T de cuarta generación pueden include factors que mejoran la expansión de células T, la actividad antitumor y la persistencia。⁷

generación CAR o TRUCK, el panel PersistenceT^TM这是一个非常好的herramienta para monitorización a corto o largo plaza de la persistencia in vivo células CAR-T en el entorno preclínico。

Resumen

Medir la persistencia de células CAR-T是对PersistenceTTM面板的检测。新面板citometría de flujo允许确定纵向的持久性células CAR-T部分pequeño卷。Nuestro panel Human CompTTM (tabla 2) es un excelente ejplo de cómo se pueden agregar otros panel calificados a estudio preclínico de células CAR-T para la generación de conjuntos extivos de datos de citometría de flujo。

手鼓2。Marcadores个人面板的人类计算机^TM．

Para obtener más información sobre cómo se puede incorporated el panel PersistenceT^TMO uno de nuestros otros panel de citometría de flujo en SUS investigation ones de oncología preclínica y conocer más sobre nueststro extenso program de citometría de flujo，Comuníquese con los científicos。

el你是动物的主人SeEjecutódeConformidadConLas Normativas de BieneStar Animal en Un Centro Acreditado Por La Aaalac ConRevisiónyAprobacióndeCatectodel Iacuc。