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UnanálisismásProvundode Inmunofenotipo de Linfocitos T infiltrantes

日期:2019年8月

作者:David Draper,PHD |科学发展助理主任

在该技术聚光灯中,我们通过呈现使用新的扩展Compt™面板生成的数据,将T细胞激活和区分水分分析进行流程分析,展示后一种能力,该功能将T细胞激活和差异化到LabCorp服务组合中的任何其他面板上方的水平。

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LaCitometríade Flujo Que Upplea Grandes Paneses De Internerpos Tiene La Ventaja de Analizar Una Mayor Cantidad de SubgruposdeCélulas。Esta Copicidad Tiene Una Importancia特定Cuando Se Reqieren Datos Destivos,Pero El Materional DixoxibleAnaálisisesIngaado。Asimismo,Los Paneses Con Una Gran Cantidad de IteruerposTambiénSePePueden USAR Para Habilitar DatosInmunofenotípicosextensos de Algunos Subgrupos O UnAnálisisAúnMásProfundode Un Solo Subgrupo。EN EsteArtículodstacadosobretecnologíademostramos Una de nuestrasprestacionsmásnuevastheeando datos generados usando el nuevo面板扩展Compt™,Un Panel De 16 Colores Que Lleva AlAnálisisde Flujo deActivaciónyFiverencióndeCélulasTTAUN Nivel Por Encima de Cualquier OtroPanel en La Cartera de Servicios de Covance。

EL Panel Adding Compt™SESERSUYóSOBRELABase Del Panel Compt™,Nuestro PanelEstándarmáspoundparaelanálisisdecélulastd4+Y CD8.+。Este Panel MejoradoañadeMarcadoresdeCélulastefectoras y de Memoria Y Cuatro Marcadores Adicionales Para ElAnálisisde laActivaciónyELGoTamientodeCélulasT.LaTabla 1描述Los Componentes Del Panel扩展Compt™Y,Mediante El Uso De Adenocinomas de Colon MC38穆里诺斯Sin Traatar,La Figura 1 Ilustra Su Estrategia de GatingYanálisis。

Tabla 1:反射仪DEL面板扩展Compt™YDescripcióndeuiuridad

逆烟渍/陶油 Descripción.
CD45 MarcadordecélulasinMunitariasPan
CD3 MarcadordeCélulasPan-T
CD4 CD4 + T细胞标记
CD8 CD8 + T细胞标记
Foxp3. MarcadordeCélulasttsupadadoras
CD25. MarcadordeCélulastrendadoras /受体IL-2
CD44 Marcador deActivación/ Memoria
CD62L. Marcadordecélulastvírgenes/ Memoria
ki-67. Marcador dePlayiferación.
CD69. Marcador deActivacióndecélulast
PD-1 Marcador deActivación/ AgotamientodeCélulast
Lag-3. Marcador deActivación/ AgotamientodeCélulast
蒂姆3. Marcador de agotamientodecélulast
ICOS. Marcador deActivacióndecélulast
格兰扎蒂米B. Marcador de Citotoxicidad Antirumoral
Tinte de Viagilidad. Exclusióndecélululasuertas
EL面板扩展Compt™SE PUEDE Adaptar Para Chantuir MarcadoresdeCélulasNK/ NKT(CD49B / CD335)Y Permerir LaExpresióndeMarcadoresdeActivaciónYCANZIMAB EN Estos Subgrupos。

Estrategia de Gating Del面板扩展了Compt™

Al Igual Que Condos Los PanesesdeCélulasTECOVANCE,ElAnálisisComienzaConlaForusióndeCélululasMuertasyyladellimitacióndecélulasinmunitariascd45+Hasta El GateEncélulastd3+(没有SE莫斯特拉)。La Figura 1a Muestra Los Criteriosdevaloracióndescendentesdelanálisisdecélulastd4+Y CD8.+que tienen encomúnlos paness compt™y扩展Compt™。estos包含cd69 y pd-1,queAumentan al Momento de laActivacióndecélulast.SuExpresiónSeHaCorrelacionado Con El FenotipodeCélululasTGotadas。[1]OTRO Criterio deValoraciónNCOMúnSlaLliferacióndeCélulasTCD8+,Que Se Logra Mediante El Uso de laExpresióndeki-67 Como Marcador Secundario。Finalmente,SEAnizanlascélululast cd4+Para CualtificarLasCélulasTColaboradorasYLasCélulasT校长(Treg)。Las Figuras 1B Y 1C Ilustran Los CriteriosdeValoraciónAdicionalesQue Se Usan Para Ampliar El Modelo Compt™,Los Cuales SE描述了Zh Mayor DetalleAclowuación。

图1:AnálisisdeCélulasTEMianteEL面板扩展了Compt™。SE Recolectaron肿瘤MC38 Sin TraTar de Ratones C57BL / 6。(a)CuantificacióndeCélulasCD4+ Colaboradoras,CélulasTCD8+ y Treg,Cantuida LaMedicióndoLliferación(Análisisde Ki-67)Y LaExpresióndeMarcadoresCD69/ PD-1。(b)análisisdecélulastd8+ efectoras / de memoria para cuantificar los subgruposdecélulasvírgenes,teff,tem y tcm。(c)AnálisisAmpriadosdoMarcadoresdeActivación/ AgotamientodeCélululasT,包括La Granzima B. Los Picos Rojos TapperanLasCélulasDianaConTinción。Los Picos Azules Tappican Los Controles Negitivos SinTinción。
图1:AnálisisdeCélulasTEMianteEL面板扩展了Compt™。SE Recolectaron肿瘤MC38 Sin TraTar de Ratones C57BL / 6。(a)CuantificacióndeCélulasCD4+ Colaboradoras,CélulasTCD8+ y Treg,Cantuida LaMedicióndoLliferación(Análisisde Ki-67)Y LaExpresióndeMarcadoresCD69/ PD-1。(b)análisisdecélulastd8+ efectoras / de memoria para cuantificar los subgruposdecélulasvírgenes,teff,tem y tcm。(c)AnálisisAmpriadosdoMarcadoresdeActivación/ AgotamientodeCélululasT,包括La Granzima B. Los Picos Rojos TapperanLasCélulasDianaConTinción。Los Picos Azules Tappican Los Controles Negitivos SinTinción。

Análisisdecélulastefectoras y de Memoria

elanálisisdediferencióndecélulastd8+efectoras y de Memoria Se Muestra En La Figura 1B。laconvertióndecélulasten联合国Fenotipo de Memoria es重要e Al EltaMunestaInmunológicaDuraderaA LaReexpoIciónNELContexto dePatogénesisdeInfecciónyCáncer。ElAnálisisde CD44 Y CD62L Permite LaDelimitacióndeCélulasTENCuatro Estados deDiferención。Estos ChantuyenLasCélulastvírgeneso inactivadas,lascélulastefectorasactadas(teff)y los subgrupos de Memoria Efectora(TEM)Y Memoria Central(TCM)。LOS子宫TEM Y TCM PUEDEN循环佩罗Tienen Tendencias A Resider en Tejidos No Linfoides Y Linfoides,尊重。[2]通知Readitees Han Demostrado Que Ambos SubgruposDesemñanFioncionesTinttasen La Respuesta Antirumoral。Másrecietemente setappóque una tercerapoblacióndememoriaresidente(trm)riene un papel基本en El控制del crecimiento tumoral en Una variedad de modelos y se puede delimitar mediante el Uso de Cd103,Entre Otros Marcadores。[3]EL Panel扩展了Compt™Se Puede Adaptar Para Chantuir ElAnálisisdeCélulasTrm。

ActivaciónyAgotamientodeCélulastyanálisisde granzima b

El panel Expanded CompT™包括análisis de ICOS, LAG-3, TIM-3 y granzima B, que son cuatro biomaradores muy analizar ar funcionalidad de células T(图1C)。El análisis de estas dianas por sí solas y en conjunto sores of potential anti - tumor de las células T CD8+。La evidencia respalda una función coestimuladora y antitumor para señalización del receptor ICOS, lo cual convert a ICOS en una terapéutica atractiva.[4]La granzima B general almenta use of biomarador de actividad citolítica y be correlation of as reuestas células T CD8+。:, PD-1 LAG-3 y TIM-3儿子受体inhibidores y,如果好拉表达式的值de来说非常受体se ha vinculado con el agotamiento de中和T, una cantidad de拿督每一旦市长sugiere干草heterogeneidad las之间subpoblaciones dentro de中和T CD8 +表达式的值de PD-1监狱。[5]Esta heterogeneidad tiene una correlación con el patrón de expresión de estos receptor inhibitor。我们可以确定对增殖和破坏肿瘤具有潜在区别作用的不同类型的肿瘤La figura 2 ilustra cómo el panel Expanded CompT™puede cuantificar células con una expresión positiva doble y triple de receptorres inhibiores y aportar datos sobre el subgroupo heterogéneo de células T con expresión de PD-1 y su funcionalidad。本文描述了影响肿瘤免疫恢复的因素以及activación de células T y受体抑制因子;包括TIGIT、OX-40、CD137、CTLA-4等。 Covance tiene experiencia en el análisis de muchos de estos marcadores en análisis tumorales离体。ConMínimosEsfuerzosde desarrollo,El Panel扩展了Compt™Se Puede Adaptar Para满意者Sus NecesidadesPreclínicasúnicas。

图2:AnálisisMultiplexado de Marcadores deActivación/ AgotamientodeCélululasTENCélulasdeDivadasde肿瘤MC38 Sin TraTar。EL面板扩展Compt™MIDE LACoexpresióndevariosbioMarcadoresdecélulastpara el agotamiento y la actividad antirumoral同时annmentee。EN Este Ejetimho,Primero SePorticóELGATEDDECÉLULASTP1+ Y CD8 +。ElAnálisisDescendente Luego CuantificaLasCélulasConExpresiónPosivaDoble Y Triple de PD-1,Lag-3 Y Tim-3。
图2:AnálisisMultiplexado de Marcadores deActivación/ AgotamientodeCélululasTENCélulasdeDivadasde肿瘤MC38 Sin TraTar。EL面板扩展Compt™MIDE LACoexpresióndevariosbioMarcadoresdecélulastpara el agotamiento y la actividad antirumoral同时annmentee。EN Este Ejetimho,Primero SePorticóELGATEDDECÉLULASTP1+ Y CD8 +。ElAnálisisDescendente Luego CuantificaLasCélulasConExpresiónPosivaDoble Y Triple de PD-1,Lag-3 Y Tim-3。

Adaptación:Análisisdecélululasnk / nkt y otrasopciones

Covance Puede Configurar Paness Adaptados Con Hasta 18颜色,Lo Cual Permite Crear Opciones Para El Panel MI-Advanceed Compt™。Ademásde sustituir o Agregar Diferentes Marcadores deActivaciónyGotamientodeCélulasTTalComoSE描述了ENLASCCİNANTERION,ELANÁLISISDECÉLULASNK/ NKT ES联合国CriteriodevaloraciónPotencialmenteValioo。Eso ES Posible ATravésdeLonsordióndamadoresCD49B/ CD335 Al Canare(Figura 3)。

图3:adaptación del panel Expanded CompT™para permitir el análisis de subgrupos de células NK y NKT en células derivadas de tumor MC38 sin tratar。Se utilizó la expresión de CD3 para delimitar las células NKT y las células NK CD49b/CD335+。Se cuantificaron los niveles de expresión de la granzima B en to subgrupos mediante el análisis descendant。

图3:adaptación del panel Expanded CompT™para permitir el análisis de subgrupos de células NK y NKT en células derivadas de tumor MC38 sin tratar。Se utilizó la expresión de CD3 para delimitar las células NKT y las células NK CD49b/CD335+。Se cuantificaron los niveles de expresión de la granzima B en to subgrupos mediante el análisis descendant。

Lascélulasnkynkt son una fuente重要的deifnγ,tienen efectos incirectos en las mejoras de las Respuestas Antitumorales delascélulastd8+ y pueden destruir directamentelascélulastumorales al liberargránuloscitolíticostales como la granzima b. [7,8] otrasopciones crepuyenifnγ,tnfαuotrosanálisisde citocinas para联合国perfilmás尾气decélulast pd1 + y pd1-cd8 +。TambiénPuedeAgregarelanálisisde cd103 para examinarlascélulastde Memoria Residente Para Lograr联合国PerfilMásFirectodeCélulasTde Memoria en En El肿瘤。EL EQUIPO DE COVANCE STIENE SOMPRIA体验en EN EL DESARrollo de Servicios Adminados deCitometríade Flujo。要了解有关如何将扩展的Compt™面板合并到您的临床前研究中,请联系Labcorp的科学家。yaboapp体育官网

参考文献


1江,Y.,Y. Li,和B.朱。“肿瘤微环境中的T细胞疲惫。”细胞死亡和疾病6,6(2015):E1792。

2Klebanoff,Christopher A.,Luca Gattinoni和Nicholas P. Restifo。“CD8 + T细胞记忆在肿瘤免疫学和免疫疗法中。”免疫审查211,1(2006):214-224

3.Mami-Chouaib, Fathia, et al. "驻留记忆T细胞,肿瘤免疫中的关键成分。"癌症免疫疗程6,1(2018):87。

4.Amatore,Florent,Laurent Gorvel和Daniel Olive。“诱导型共刺激器(ICO)作为抗癌治疗的潜在治疗靶标。”关于治疗目标的专家意见22,4(2018):343-351。

5.米勒,Brian C.等人。“耗尽的CD8 + T细胞的子集差异介导肿瘤控制并响应检查点封锁。”自然免疫学20,3(2019):326。

6.熊,惠忠,等。“抑制性受体的共表达富集鼠同胞肿瘤模型中的活化和功能性CD8 + T细胞。”癌症免疫学研究7,6(2019):963-976。

7.朱,桑宁,博黄,珏石。“Fas配体和裂谷颗粒差异控制自然杀伤细胞对癌症目标的细胞毒性动态。”onCotarget.7,3(2016):47163。

8.赵,杰,等。“多克隆型II天然杀伤T细胞需要PLZF和SAP进行它们的发育,并有助于CPG介导的抗肿瘤反应。”国家科学院的诉讼程序111,7(2014):2674-2679。
elCuidado Y Uso De AnimalesSeEjecutódeConformidadConLas Normativas de BieneStar Animal en Un Centro Acreditado Por La Aaalac ConRevisiónyAprobacióndeCatectodel Iacuc。

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