经合组织231:内分泌干扰物筛选计划-两栖动物变态分析

autor：

Sarah Broadley，理科学士(荣誉)，理科硕士，PGCE，研究科学家IV，专业病理服务;Dr. Catherine Ross，英国哈罗盖特Covance Laboratories Ltd.病理科博士，医学博士，MRCVS，病理学家

基准:

Januar 2021

einführung

“内分泌干扰物是一种外源性物质或混合物，它会改变内分泌系统的功能，从而对完整生物体、其子代或(亚)种群造成不利的健康影响。”WHO-ICPS，2002年。

由于担心环境化学物质可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，以修订和开发指南，以筛选和测试潜在的内分泌干扰物。试验包括加强啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变态试验(AMA试验指南231)。

“内分泌干扰物是一种外源性物质或混合物，它会改变内分泌系统的功能，从而对完整生物体、其子代或(亚)种群造成不利的健康影响。”WHO-ICPS，2002年。

由于担心环境化学物质可能对人类和野生动物造成不利影响，经合组织启动了一项高度优先的活动，以修订和开发指南，以筛选和测试潜在的内分泌干扰物。试验包括加强啮齿动物28天重复剂量试验(试验指南407)和两栖动物变态试验(AMA试验指南231)。

Regulierungen

2018年，经合组织发布了修订后的《内分泌干扰物检测和评估概念框架》。概念框架包括五个级别的测试，被设计为一个工具箱。

一级-根据现有信息进行排序和排序。

二级-体外分析提供机理数据。

三级-体内分析提供有关内分泌机制和作用的数据。

四级-体内分析提供了有关内分泌机制的不良影响的数据。

5级-在体内测定中，提供了内分泌和其他机制的综合数据。

两栖动物变态测定与鱼短期繁殖测定，子宫繁殖测定和Hershbergers测定相同

目前，在欧盟没有法定要求使用内分泌干扰的特定测试，除非要求这样做。

然而，在美国，检测是强制性的，美国环境保护署(EPA)制定了两级策略。

一级分析-体外和体内试验方法的选择。两栖动物变态试验和鱼类短期繁殖试验都属于这一范围。

二级分析-体内顶端测定，包括哺乳动物2代毒性，两栖生长/繁殖，AVIAN 2代，鱼2代和Mysid 2代。

两栖动物变态测定

材料和方法

两栖变态测定（AMA）是旨在经验鉴定可能干扰下丘脑 - 垂体 - 甲状腺（HPT）轴的正常功能的物质的筛选测定。它提供了一种良好的研究，甲状腺依赖性过程，响应HPT轴内有源的物质，并且是唯一的现有测定检测在经历形态发育的动物中的甲状腺活性。

测试设计涉及暴露第51阶段非洲爪蟾蜍光滑的蝌蚪至少三种不同浓度的测试化学品和水控制21天。幼虫密度为每次试验箱20蝌蚪。

第七天测量

5只蝌蚪被随机选择，并被人道地安乐死。他们被冲洗，吸干和体重测定。确定了每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

21天的测量

剩余的蝌蚪从测试罐中取出并人道地安乐死。他们被冲洗，吸干和体重测定。确定了每只蝌蚪的后肢、口鼻到气孔的长度和发育阶段。

蝌蚪被放置在戴维森固定液中48到72小时，要么作为整个样本，要么作为包括下颌在内的头部样本。

每个鱼缸有5只蝌蚪进行组织病理学检查。

组织学制备

组织调整-整个头部加工成石蜡。

嵌入,头部埋于水平面上(纵向(LS))或面朝下(横向(TS))。

切片法,甲状腺分五个步骤切片，用苏木精和伊红染色

Histopathologie

诊断标准包括：甲状腺肥大/萎缩滤泡细胞肥大滤泡细胞增生

滤泡腔面积/胶质质量和滤泡细胞高度/形状

图1所示。甲状腺(箭头)，纵切面，x2倍放大。

图2.甲状腺（箭头）。x10放大倍数。条=50μm。

图3。甲状腺(箭头)，横切面，x2放大倍数。

图4。甲状腺(箭头)，横切面，x10倍放大。柱= 100µm。

结果

在没有发育效应的情况下，已经证明了对甲状腺组织学的影响。如果在甲状腺中看到组织病理学变化，则认为它被认为是活性的。如果没有看到发育延迟和没有组织病理学变化，则将化学物质被认为是甲状腺无活性。这是因为甲状腺受到甲状腺刺激激素（TSH）的影响，并且任何改变甲状腺激素的任何化学物质都会充分改变TSH分泌将导致甲状腺细胞病理学变化。

Verweise

经合组织(2018)，《评估化学品内分泌干扰的标准化测试指南修订指南文件150》，经合组织测试和评估系列，经合组织出版，巴黎。https://doi.org/10,18/9789264304741-en

OECD(2009)，第231号试验:两栖动物变态分析，OECD化学品测试指南，第2节，OECD出版，巴黎，https://doi.org/10,18/9789264076242-en。