Arzneimittel-Wechselwirkungen und Transporter

方法FürpransporterInteraktionen

• Aufnahme-transporter-messay
  • 测试系统:transizierte zelllinen, SLC-Transporter为Vektorkontrolle expereren, gezüchtet in Monoschichten in einem angeuchteten Inkubator，在37°C, 5% CO₂。
  • Testpuffer: HBSS mit HEPES, pH值7,4
  • Nur für MATE-Transporter werden die Zellen mit NH_4.Cl，嗯，它是pH-Gradienten über die Zellmembran einzuführen, der für die MATE-Aufnahmeaktivität erforderlich ist
  • Testartikelkonzentrongeren：2Für子系统，2个Für抑制作用
  • 放射性材料，模具für jeden Transporter spezifisch信标
  • 阳性kontrollinhibitorenfürjeden运输车

  Transporter-Exprimierende Zellen在Kultur Werden Mit Einem Assay-BufferFür30分钟在Einem Angefuchteten Inkubator Bei 37°C为5％Co₂vorinkubiert。Mate-Exprimierende Zellen Werden Mit NH4Cl Behandelt，UM Einen ph-gradientenÜberder Zellmembran Zu Erzeugen und DieAufnahmeaktivitätZuerleichtern。Ein Sondensubstrat OIN TestgeGenstands orif Zu Dreifachen Vertiefungen Gegeben，und Gegebenenfalls Werden抑制作用州Hinzugefügt。Die Platten Werden Je Nach TransporterFürEinenZeitpunkt von 2 Bis 10 Minuten Inkubiert。Der Puffer Wird Abgesaugt und Die Zellen Werden Gewaschen，Dann Lysiert，Gesammelt Unter Verwendung von LC-MS AUF DAS Vorhandensein des Testartikels分析。

  SubstratBewertung：Die Aufnahme des Testartikels Durch Jeden Transporter Callein Oder在Gegenwart Eines Selektiven抑制剂Wird Mit Der Aufnahme Durch Die Vektorkontrolle Nach 2-5-Minütiger泄露Verglichen。Die Aufnahme Eines Sondensubstrats Durch Jeden Transporter Seriin Over在Gegenwart Eines Selektiven抑制剂und Durch Die Vektorkontrolle Wird Als KontrolleDurchgeFührt。

  抑制剂:在Gegenwart eines selektiven odes Testartikels中，它的底物的转运体的allein oder。它的名字是在它的基础上加上的durchgeführt。我们都知道这一点₅₀Bestimmt Werden。

• Efflux Transporter测定
  • 测试系统:Caco-2-Darmendothelzellen des Menschen, Transwell-Platten培养基，在37°C, 5% CO中₂FÜR21-24架
  • 测定方法:HBSS、HEPES、pH值7,4 sowohl
  • Der Transendothelialle Elektrische Widerstand（Teer）Wird Vor Dem Assay Gemessen，UM Die Bildung Enger vermindungen zuBestätigen
  • Testartikelkonzentrongeren：2Für子系统，2个Für抑制作用
  • 放射治疗Permeabilitätsmarker我们的医院和医院都是这样，我们的医院都是这样的
  • Es Werden radadaktiv Markierte Sondensubst Verwendet，Diefür·吉登运输车Spezifisch Sind
  • 阳性Kontrollektive抑制作用抑制作用抑制作用NER JEDEN TRANCTIONER MIT Nealativen抑制

  在Transwell-Platten的估计下，Permeabilität von Testgegenstand和Sondensubstraten在基底骨侧(A-B)和基底骨侧(B-A) Richtung的sowohl。在化验中浸泡30分钟，在37°C, 5% CO中浸泡₂Wird Die Sonde Oder Der Testgegenst在Eine Kammer（Spender）Mit Einem Blindpuder在DerGegenüberliegendenKammer（Empfänger）Gegeben。Gegebenenfalls Werden Dann在展出的Kammern抑制作者Gegeben。Die Platten Werden 2令人惊叹的北米3.5％Co₂Inkubiert。Spender-undEmpfängerkammerprobenwerden gesammelt und unter verwendung von lc-ms auf dasvorhandensein des testartikels分析。Dann Werden DiePemberbilitätststartarkelsund dasausflussverhältnisbestimmt。

  SubstratBewertung：Der Trans Testartikels Interin Oder在Gegenwart Selektiver抑制作用者在Beichtungen Bestimmt。Der Transport eines SondensubstratsFür·吉登运输队谢里·奥林·艾塞德Selektiver抑制作用engry Als KontrolleDurchgeFührt。

  抑制物:运输的eines sondensubstrate wirnach 2-stündiger在Gegenwart eines selektiven Hemmstoffs oder des Testartikels berichtungen beestimmt。所有的射流传输都是一样的₅₀Bestimmt Werden。

• VesikulärerMembranaufnahme-assay
  • TestSystem：Membranvesikel（50μg/孔），Die Den Efflux（ABC） - 重塑者BSEP Exprimieren。
  • Testgegenstandskonzentrationen: 2 für Substrattests;2毛Inhibitionsassays。
  • 腺辛磷磷酸（ATP）-AbhängigeAktivitätGemessen，Wibei腺苷莫磷磷（AMP）Als Kontrolle Verwendet Wurde。
  • Radiomarkiertes Sondensubstrat，SpezifischFürBsep
  • 阳性kontrollinhibitorenfürjeden运输车

  Membranvesikel，Die BSEP UND DEN TASTGEGENSOND ODER DAS SONDENUBSTRAT EXPRIMIEREN，在PLATTEN MIT 96 Vertiefungen Inkubiert中。Die Aufnahme Wird Durch Zugabe von adenosintriphosphat（ATP）undAnschließendeindubationFür30分钟北°C EingeleiteTeit。腺苷癌磷脂（AMP）WiRd Party Als Negativkontrolle Verwendet。Die Aufnahme Wird Durch Vakuumaspiration undZweimaligesSpubülender过滤器MITÜberschüssigemeiskaltem transportBudingBuder Beendet。AnschließendWerdenvesikel aus filterplatten extrahiert，um die lc-ms zu direfizieren und die Atp-AbhängigeAktivitätZu Berechnen。

  SubstratBewertung：Die Aufnahme des Testartikels Sillin und Mit Selektivem Hemmstoff在Gegenwart von Atp Wird Mit der Aufnahme在Gegenwart Von Amp Verglichen。Die Aufnahme Eines Sondensubstrats Durch BSep Carrein UND在Gegenwart Eines Selektiven Hemmstoffs Wird Als KontrolleDurchgeführt。

  hemmstofwertung:在Gegenwart有一个选择的hemmstoffels。在genwart von ATP的名字和在genwart von AMP verglichen的名字。她的名字是ATP-abhängigen，她的名字是电子邮件的缩写₅₀Bestimmt Werden。