基准:据/b>2020年8月据/p>
作者:据/b>大卫德珀,博士据/p>
EntzündungsförderndeZytokinreaktionen在韦尔明恒麻省MIT DAR表达式von Granzym B und CD107a(Lamp-1)Sind Wertvolle Biomarker在Der Immunkologie据sup>1-3据/sup>.Zellbasierte Assays, die die Expression dieser Ziele in von tummoren abgeleiteten Effektorlymphozyten quantifiieren können, liefern Einblicke in den Wirkungsmechanismus von wirkstoffcandidaten。临床前肿yaboapp体育官网瘤组von Covance是一个新标准测试,在Zytokin-/Zytotoxizitäts-Standard-Durchflusszytometrie-Panel verwendet, um diese Endpunkte in T-Zell-, natürlichen Killerzell(NK)-和natürlichen Killer-T-Zell(NKT)- untergruppen zu quantifiieren。diesel Artikel zeigt, wie das Cytokine/Cytotoxicity™-Panel in据i>in-vivo.据/i>-Sudien Integhiert Werden Kann Und在Kombination Mit Der KonventioneLen免疫医疗博物馆SolideDatensätzeWährendderPräklinischenWirkstoffentWicklungZu Eertheren。据/p>
Zytokine,EinschließlichIFN1,TNFαund IL-2,Weisen EineAntitumoraktivitätAuf,Indem Sie Die Grundergende und Adaptive Aktiierung von Immunzellen und Diremiveren von Tumlen and Der Tummorkroumgebungfördern。据i>in-vivo.据/i>- therien, die as Tumorwachstum durch T-Zell-Aktivierung hemmen (durch direkte oder indirekte mechanmen), erhöhen oftmals Häufigkeit von Tumor-infiltrierenden T-Zellen, die darauf vorbereitet sind, heftig auf据i>离体据/i>刺激祖茂堂reagieren。Es wurde gezeigt, dass in NK- und NKT-Zellen in Bezug auf das Priming and die anschließende IFNγ/ tnf α- production ähnliche Effekte auftraten。Zusätzlich zur zytokin production kann eine据i>in-vivo.据/i>-behandlung effektorlymphozyten dazu Veranlassen,erhöhtezytotoxischeeigenschaften zu erwerben,Die dud tumorlyse Durch Direkten Kontakt von ZellenErmöglichen。Dieser Prozess Wird Gird Gesteuert Durch Die表达und Freisetzung von Perforinen und Granzymen Aus Zytolytischen Granulaten,在Den Immunzellen Gespeichert Sind中死亡。Diese毒素Zerstörendiezellmembranund Induzieren Apoptose在Der Zieltumorzelle。Darüberhinaus findets die zhleichzeitig mit der表达von cd107a auf deroberflächeder effektorzelle statt und Kann Somit Als Marker FumitzyoxischeAktivitätVerwendetWerden。据/p>
我们的名字是können祖沙曼,我们的名字是淋巴zyten- untergruppen。Das Cytokine/Cytotoxicity-Panel ermöglicht diese Messungen durch combination der Zelloberflächen-Immunphänotypisierung unter Verwendung von T-Zell-, NK- und NKT-Zell-spezifischen Antikörpern mit intrazellulärer Färbung für Zytokine and Granzym-B-Expression (Tabelle 1)。据/p>
Tabelle 1:细胞因子/细胞毒性™-Panel据/b>
Antikörper/ Farbstoff.据/b> |
Beschreibung据/b> |
CD45据/p> |
Pan-hämatopoetischerZellmarker据/p> |
CD3.据/p> |
PAN T-Zell-Marker据/p> |
CD4.据/p> |
CD4.据sup>+据/sup>-t-zell-marker据/p> |
CD8.据/p> |
CD8.据sup>+据/sup>-t-zell-marker据/p> |
CD49B / CD335.据/p> |
Naturliche Killerzell——/ Naturliche-Killer-T-Zell-Marker据/p> |
干扰素γ据/p> |
Entzündungsförderndeszytokin据/p> |
TNFα.据/p> |
Entzündungsförderndeszytokin据/p> |
* - 2据/p> |
T-Zell-Aktivator据/p> |
Granzyme B据/p> |
Zytotoxizitatsmarker据/p> |
CD107a据/p> |
Degranulationsmarker据/p> |
Vitalitätsfarbstoff.据/p> |
Ausschluss填充Zellen.据/p> |
* IL-2 Kann Durch Andere Zytokine Ersetzt Werden,Darunter IL-4 und IL-17A据/i> |
Aus 4T1-Luc-Tumor Abgeleiten Effektorzellen Nach Bestrahlung und抗MCTLA-4-Therapie分析von Zytokinen und Granzym B据br>
细胞因子/细胞毒性-面板zur Messung von Zytokinen和Granzym B连接在diem Datensatz unter Verwendung des murinen 4t1 - lucc - mammakarzinom模型演示。Abbildung 1 zeigt die gatingstrategy zur Abgrenzung von T-Zell和NK-Zell-Teilmengen。Wie bei allen unseren präklinischen Durchflusszytometrie-Panels für die Onkologie begin die analysis mit dem Ausschluss toter Zellen and der anschließenden Abgrenzung von CD45据sup>+据/sup>-免疫,嗯,有趣的是免疫。Dargestellt sind repräsentative关于IFNγ, TNFα, IL-2和granzym - b表达的PMA/ ionomycin刺激。据/p>

Die 4t1 - luco - tumormiromgebung ist stark immunosuppressiv and ist durch das Vorhandensein eines gro en granulozytisch-myeloisch-abgeleiteten suppressorzell浸润(nicht dargestellt) gekennzeichnet。4T1-luc在模型中,在模型中,在检查点hemmstoffen抵抗者中。在联合mit Strahlung von der Small Animal Radiation Research Platform (SARRP, Xstrahl) verbessert Anti-mCTLA-4 jedoch die Hemmung des Tumorwachstums von 4t1 - lucc - tummoren (Abbildung 2A, links)。我们是肿瘤患者,我们是肿瘤患者。zurückzuführen,我们是肿瘤患者,我们是肿瘤患者。erhöhte,我们是肿瘤患者据i>in-vivo.据/i>-Behandlung zeigt, verglichen是isotype - kontrollgruppe (Abbildung 2A, recht)的成员。死据i>离体据/i>- Tumorzellen mit PMA/Ionomycin zeigt jedoch, dass CD8据sup>+据/sup>-t-zellen eineerhöhtefähigkeitzur produktion vonifnγaufweisen。Darüberhinaus exprimieren nk-zellen im vergleich zu kontrollgruppenhöhermengen一个granzym b(abbildung 2b)。Diese Daten Legen Nahe,Dass Eine Kombinierte Behandlung Mit Bestrahlung und Anti-McTla-4 Den Aktivierungszustand von CD8据sup>+据/sup>-T-Zellen和NK-Zellen verbessert。这是一个机械学家的标记,在denen Wirksamkeit和Immunphänotypisierung angestrebt werden。据/p>

ABBILDUNG 2:Effektorzellen IM 4T1-Luc-Modell的Analyze derEntzündungsförderndendend。Balb / C-MäuseMitetablierten 4T1-Luc-tumoren(n = 6 / Gruppe)Wurden Mit Anti-Mctla-4(Klon 9d9),Fokaler Strahlung(“Rad”; Sarrp,Xstrahl Inc.),Einer Kombination der Beiden臭臭虫Isotyp-kontrollantikörperhodelt。Die Tumore Wurden在EinzelzellsuspeonseNen(Gentlemacs™,Miltenyi Biotec)Dissoziiert und Vor der Datenerfassung Mit FluoreszierendenAntikörpernMarkiert。Fürdiezytokin-und granzym-b-分析Wurden Tumorzellen在Gegenwart von Brefeldin A 5令人震惊的朗格evivo mit PMA /离子霉素刺激。Nach der Inkubation Wurden Die Zellen Gesammelt und AufIntazelluläreZieleImmungefärbt。Die Laten Wurden Mit Einem Attune™-NXT-DurchFlussZyometer(Thermofisher Scientific)Erfasst undAnschließendMit der Flowjo-Software(BD)分析。据/cite>
CT26-Tumor abgeleiteten Effektorzellen nach Behandlung mit Anti-mCTLA-4脱粒分析据/b>
CD107a wid während der Degranulation auf der Zelloberfläche expriert und ist ein Marker, der üblicherweise zur Messung behandlungsinduzierter Auswirkungen auf die zytotoxische Aktivität verwendet wid。Das细胞因子/细胞毒性™-Panel wurde verwendet, um die Auswirkungen von Anti-mCTLA-4 auf die Lymphozytenzytotoxizität und Das Tumorwachstum im murinen CT26-Darmtumor-Modell zu untersuchen。Mäuse mit CT26, die mit Anti-mCTLA-4 behandelt wurden, regieren mit einer 74% Tumorwachstumshemmung (Abbildung 3A)。Um die Zytotoxizität zu untersuchen, wurde die CD107a和granzym - b在CD8中的表达据sup>+据/sup>-t-zellen,nk-und nkt-zellen nach据i>离体据/i>- Tumorzellen和PMA/离子霉素gemessen的刺激。Repräsentative Expressionsprofile sind in Abbildung 3B dargestellt。分析zeigt, dass Behandlung mit Anti-mCTLA-4 eine Erhöhung der CD107-Expression in allen drei Untergruppen im Vergleich zu mit isotype - kontrolle behandelten Tieren auslöst。gleichzeeitig verringern sidie Granzym-B-Expressionsniveaus in NK- and NKT-Zellen。在NK- and NKT-Zellen während der degranzym - b - speicher中使用。这是一个比较重要的指标,即granzym - b在CD8基因中的表达据sup>+据/sup>-T-Zellen zwischen den Gruppen nicht unterschied, möglicherweise aufgrund eines Gleichgewichts in der据i>de-novo.据/i>-表达Granzym B, ausgelöst durch die Behandlung and die degranzym B, ausgelöst durch die Behandlung and die degranzym BZusammengenommen steht dieser Phänotyp im Einklang mit einer behandlungsbedingten Verbesserung der Zytotoxizität und des Potenzials für eine direkte Abtötung von Tumorzellen。据/p>

Abbildung 3:分析Zytotoxizität im ct26 - model。BALB/c-Mäuse mit etablierten ct26 - tummoren (n=10/Gruppe) wurden mit Anti-mPD-1 (Klon RMP1-14) order Isotyp-Kontrollantikörpern behandelt。ex-体内刺激undimmunphäotypisierungwurden wie oben beschriebendurchgeführt。据br>
Anpassung - Panel-Konfiguration zum Anpassen der Zytokin-Antworten据/b>
Das cytokine / cytotoxicity™-Panel Ist Vorkonfiguriert,UMEntzündungsförderndeZytokineZu Messen。Das Panel Kann Auch Angepasst Werden,Um Andere Zytokinreaktionen Zu Untersuchen。Zum Beispiel Diglerenzieren Helfer-CD4据sup>+据/sup>-T-Zellen在verschiedene CD4中据sup>+据/sup>-effektor-Phänotypen,Darunter Th1,Th2 und Th17。Diese Untergruppen Spielen Unterschiedliche Lollen Bei der Tummorpatheese。Th1-Zellen Sind Durch Die Freisetzung vonIfnγGekennzeichnet,Währendth2und th17 Durch Die Produktion von Il-4 Bzw。IL-17 CharakterisiertWerdenKönnen。Das Cytokine / Cytotoxicity™-Panel Kann So Angepasst Werden,DASS ES IL-4 und IL-17AEnthält,UM Die Mechnistische分析BehandlungsInduzierter effekte Auf Dightizierung von Helfer-T-Zellen在Der Tumormikroumgebung Zu Erleichent。据/p>
要了解更多关于细胞因子/细胞毒性™面板如何可以纳入您的临床前肿瘤研究,请与Labcorp的科学家联系。yaboapp体育官网据/p>
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1.Clynes, R. A., & Desjarlais, J. R.(2019)。肿瘤治疗中T细胞毒性的重定向。医学年度回顾,70,437-450。据br>
1.Clynes, R. A., & Desjarlais, J. R.(2019)。肿瘤治疗中T细胞毒性的重定向。医学年度回顾,70,437-450。据br>
2. Miller,J. S.,Lanier,L. L.(2019)。癌症免疫疗法中的天然杀伤细胞。据i>癌症生物学年度回顾据/i>那据i>3.据/i>, 77 - 103。据/p>
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