基准:2019年8月
奥特:David Draper,博士| Stellvertretender董事,Wissenschaftliche Entwicklung
在diesem Tech-Spotlight demostrieren wir die letztere Fähigkeit, indem wir Daten präsentieren, die mit dem neuen Expanded CompT™-Panel generiert wurden, einem 16-Farben-Feld, das die Flussanalyse der t - zel - aktivierung and -Differenzierung auf ein Niveau hebt, das über jedem anderen Feld im Serviceportfolio von Labcorp liegt。
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Die Durchflusszytometrie unter Verwendung großer Antikörper-Panels hat den Vorteil, dass eine größere Anzahl von Zellteilmengen untersucht wid。Diese Fähigkeit ist besonders wicichtig, wenn ein umfassender Datensatz erforderlich ist, jedoch nur begrenztes肿瘤材料für die分析verfügbar ist。Darüber hinaus können Panels mit einer großen Anzahl von Antikörpern verwendet werden, um einen tiefen immunphänotypischen Einblick in einige Untergruppen oder eine noch tiefere分析in einzelne Untergruppe zu ermöglichen。在diesem技术聚焦演示产品Fähigkeit, indem wir Daten präsentieren, die mit dem neuen Expanded CompT™-Panel generiert wurden, einem 16-Farbfeld, das die Flussanalyse der t - zel - aktivierung and -Differenzierung auf In Niveau übertrifft, das über jedem anderen Feld im covs - serviceportfolio light。
Das erweiterte CompT™- panel baut auf dem CompT™- panel auf unserem beliebtesten Standardpanel zur Untersuchung von CD4+- und CD8+- t - zellen。diesel verbesserte面板fügt Effektor und Speicher-T-Zell-Marker sowie vier zusätzliche Marker zur Analyse der T-Zell-Aktivierung und -Erschöpfung hinzu。表1扩展的CompT™面板和未处理的小鼠MC38-Kolonadenokarzinomen der鼠zeigt Abbildung 1塞纳门控和分析策略。
表1:Erweiterte CompT™-Panel-Antikörper und Beschreibung ihres Nutzens
Antikörper / Farbstoff | 使用说明书 | |
---|---|---|
CD45 | 潘Immunzellmarker | |
CD3 | 潘T-Zell-Marker | |
CD4 | CD4 + -T-Zell-Marker | |
CD8 | CD8 + -T-Zell-Marker | |
FoxP3 | Regulatorischer T-Zell-Marker | |
CD25 | T-Zell-Marker/IL-2 Rezeptor | |
CD44 | Aktivierungs - / Memory-Marker | |
CD62L | 天真T-Zell——/ Memory-Marker | |
ki - 67 | Proliferationsmarker | |
CD69 | T-Zell-Aktivierungsmarker | |
PD-1 | T-Zell-Aktivierungs - / Erschopfungsmarker | |
LAG-3 | T-Zell-Aktivierungs - / Erschopfungsmarker | |
TIM-3 | T-Zell-Erschopfungsmarker | |
国际安全和发展理事会 | T-Zell-Aktivierungsmarker | |
Granzyme B | Anti-Tumor-Zytotoxizitatsmarker | |
Vitalitatsfarbstoff | Ausschluss toter Zellen | |
Das Expanded CompT™kann so angep助理werden, dass es NK/NKT-Zellmarker (CD49b/CD335) enthält, um die Expression von Granzym B und Aktivierungsmarkern in diesen Untergruppen zu ermöglichen。 |
Erweiterte CompT™-面板门控策略
Wie bei allen Covance T-Zell-Panels begindie Analyse mit dem Ausschluss toter Zellen und der anschließenden Abgrenzung von CD45+Immunzellen zum Gate auf CD3+T-Zellen。Abbildung 1A zeigt die下游- end punkte der gemeinsam genutzten CD4+- und CD8- t - zellanalyze zwischen den CompT™- und Expanded CompT™- paneelen。大足gehören CD69和PD-1, die bei Aktivierung der T-Zellen hoch正则ert werden。Ihre表达wurde mit dem erschöpften T-Zell-Phänotyp korreliert。CD8+-T-Zellproliferation, die durch Verwendung der Ki-67-Expression als Ersatzmarker bereitgestellt wid。Schließlich werden CD4+-T-Zellen untersucht,嗯Helfer-T-Zellen und regulatorische T-Zellen zu quantifizieren。Abbildung 1B和1C veranschaulichen die hinzugefügten Endpunkte, die zum Erweitern des CompT™-Panels verwendet werden。Diese werden weiter unten beschrieben。

Effektor - / Gedachtnis-T-Zellen-Analyse
模具分析效应与记忆+Abbildung 1B dargestellt中的T-Zell-Differenzierung ist。在einen的感染和感染Gedächtnisphänotyp ist wiichtig für免疫系统的感染和感染。Die CD44 und CD62L-Analyse ermöglicht Die Abgrenzung von T-Zellen in vier Differenzierungszustände。大足gehören naive oder inaktivierte T-Zellen, aktivierte Effektor-T-Zellen (Teff), Effektor-Speicher (Tem) und zentrale Speicher (Tcm)。Tem- und Tcm-Untergruppen können zirkulieren, neigen jedoch dazu, sich in nicht-lymphoiden bzw。淋巴细胞,Geweben zu befinden。[2]Jüngste Berichte haben gezeigt, dass diese beden Untergruppen unterschiedliche Rollen bei der anti - tumor - reaktion spielen。居民人口统计Gedächtnisses (Trm)在jüngerer在einer Vielzahl von Modellen和kann unteranderem mit CD103 beschrieben werden的Zeit Eine eichtige Rolle bei der Kontrolle des Tumorwachstums在einer Vielzahl von Modellen和kann unteranderem mit。[3]Das erweiterte CompT™-Panel kann angep助理werden, um die analyze von Trm-Zellen einzuschließen。
T-Zell-Aktivierung, Erschöpfung und Granzym b - analyze
Das Expanded CompT™- panel umfast ICOS-, LAG-3-, TIM-3 und Granzym B-Analysen, vier intensiv untersuchte生物标志物für die T-Zell-Funktionalität (Abbildung 1C)。Die Analyse diesel Ziele allein und in Kombination kann einen Einblick in das Antitumorpotential von CD8+-T-Zellen geben。Die Erkenntnisse stützen eine共同刺激和抗肿瘤Rolle für Die ico - rezeptorsignalisierung, wodurch ICOS zu einem attraktiven therapeutischen Ziel wid。[4]颗粒酶B wid häufig als生物标志物für die zytolytische Aktivität verwendet und kann mit抗肿瘤反应蛋白von CD8+-T-Zellen korrelieren。Umgekehrt信德PD-1, LAG-3和TIM-3抑制性雷泽普伦,和während die Expression dieser drei雷泽普伦mit der Erschöpfung von T-Zellen in Verbindung gebracht wurde, deuten wachsende Daten darauf hin, dass innerhalb der erschöpften PD-1 exprimierenden CD8+-T-Zellen Heterogenität zwischen Subpopulationen best。[5] Diese Heterogenität korreliert mit dem Expressionsmuster dieser inhibitorischen Rezeptoren。柴斯概况,大的helfen, verschiedene Subpopulationen zu definieren, die in unterschiedliches Potenzial zur wiederbelebonhaben, um Tumorzellen zu vermehren und/oder zu lysieren。[6] Abbildung 2 zeigt, wie das Expanded CompT™-Panel Zellen mit doppelter und dreifacher阳性表达für inhibitor Rezeptoren quantifizieren und Einblick in die heterogene PD-1-exprimierende t - zel - untergruppe und ihre Funktionalität geben kann。那是一种疾病,是一种疾病,是一种疾病。大足gehören TIGIT, OX-40, CD137, CTLA-4 und andere。 Covance hat Erfahrung mit der Analyse vieler dieser Marker in der体外-肿瘤分析Mit minimalem entwicklungsauw and kann der Expanded CompT™an Ihre individuellen präklinischen Anforderungen angepailswerden。

Anpassung - NK/ nkt - zellanalyze und weitere Optionen
Covance kann benutzerdefinierte Bedienfelder mit bis zu 18 Farben konfigurieren,是Optionen für das MI-Expanded CompT™-Panel bietet。Neben dem Ersetzen oder Hinzufügen verschiedener T-Zell-Aktivierungs-/Erschöpfungsmarker, wie im vorherigen Abschnitt beschrieben, ist die NK/NKT-Zellanalyse ein potenziell wertvoller Endpunkt。死鸟杜奇Hinzufügen冯CD49b/ cd335 - markn zum Bedienfeld ermöglicht (Abbildung 3)。

Abb 3: Erweiterte Anpassung des CompT™- panels, um die Analyse von NK- und NKT-Zellteilmengen in naiven MC38-Tumorzellen zu ermöglichen。Die cd3 -表达wurde verwendet,嗯CD49b/CD335+ NK-Zellen和NKT-Zellen abzugrenzen。在diesel, Untergruppen wurden durch, nachgeschaltete,分析quantifiziert中,Die expression, von Granzym B。
NK- und NKT-Zellen sineine wicichtige Quelle für IFN, haben indirekte Auswirkungen auf die Verstärkung der Antitumorreaktionen von CD8+- t - zellen und können Tumorzellen direkt lysieren, indem sie zytolytische Granulate wie Granzym B freisetzen。[7,8] Weitere Optionen sind IFNγ-, TNFα- oder andere Zytokinanalysen für ein detaillierteres proffil von PD1+ und PD1- CD8+- t - zellen。订单fügen Sie eine cd103 - analyze hinzu, um residente Gedächtnis-T-Zellen auf ein tieferes Gedächtnis-T-Zell-Profil im Tumor zu untersuchen。Das Team von Covance verfügt über umfangreiche Erfahrung in der Entwicklung kundenspezifischer Durchflusszytometriedienste。Wenden Sie siich an die Wissenschaftler von Labcorp, um mehr darüber zu erfahren, wie das扩展CompT™-Panel in Ihre präklinische Forschung integriert werden kann。
Verweise
1江,杨,李,朱。”T-Zell-Erschöpfung in der Tumormikroumgebung。细胞死亡与疾病6,6 (2015):e1792。
2克莱巴诺夫,克里斯托弗·A,卢卡·加蒂诺尼和尼古拉斯·p·雷斯蒂福"CD8 + T-Zell-Gedächtnis见《肿瘤免疫学与免疫治疗》。”免疫学检查0021,1 (2006): 214-224
3.Mami-Chouaib, Fathia et al.”Residente Gedächtnis-T-Zellen, kritische Komponenten in der tumor immunology。”癌症免疫治疗杂志6,1(2018): 87。
4阿玛托雷,弗洛伦特,劳伦特·戈维尔和丹尼尔·奥利夫"Induzierbarer Co-Stimulator (ICOS) als potenzielles therapeutisches Ziel für die krebstherapy。”关于治疗目标的专家意见22,4(2018): 343-351。
5Miller, Brian C.,等。" Untergruppen erschöpfter CD8+-T-Zellen vermitteln die Tumorkontrolle unterschiedlich und reagieren auf eine检查点封锁。自然免疫学20,3(2019): 326。
6熊慧忠,等。小鼠原系肿瘤细胞CD8+-T-Zellen基因表达的研究。”癌症免疫学研究7,6(2019): 963-976。
7朱、炎庭、黄渤、觉氏。”fasi配体和lytische颗粒steern die zytotoxische Dynamik natürlicher Killerzellen gegen das Krebsziel unterschiedlich。”Oncotarget7,3(2016): 47163。
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