ELISpot和FluoroSpot检测肿瘤抗原特异性免疫

作者：

大卫德雷珀

日期：

2020年3月

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增强肿瘤抗原特异性反应是免疫治疗的预期结果。无论是通过急性增强抗肿瘤免疫或形成长期免疫记忆，成功增强宿主适应性免疫应答的药物都有更好的临床成功机会¹. 虽然有许多检测方法可用于测量抗原特异性，但其中许多方法都有局限性，因为它们需要使用模型特异性试剂、基因工程动物或细胞亚群纯化步骤。Covance临床前肿瘤学通过ELISpot/荧光斑点分析提供了一种简单且价格合理的解决方案。yaboapp体育官网

ELISpot和FluoroSpot使用夹心ELISA技术来测量产生和释放可溶性靶细胞的频率。商业试剂盒可用于测量包括细胞因子、趋化因子、免疫球蛋白、生长因子等的靶点。在Covance，我们提供一个靶点的单色酶联免疫斑点分析（ELISpot）以及最多3个靶点的多色荧光分析（荧光斑点）。图1显示了用于分析肿瘤特异性IFNγ和IL-4产生细胞的荧光点程序的示意图。

在这项技术的聚光灯下，我们使用Hepa1-6-luc小鼠肝细胞癌模型展示了ELISpot/荧光斑点在临床前免疫肿瘤学研究中的应用（图2）。为此，我们用荧光斑点法测定yaboapp体育官网了荷瘤小鼠外周血中的肿瘤特异性免疫，结果表明体内抗PD-1治疗的检查点抑制增加循环肿瘤特异性细胞产生IFNγ的数量。此外，抗PD-1使IFNγ/IL-4细胞因子谱从免疫抑制反应转向更具促炎和抗肿瘤特征。

与疫苗的作用机制相似，生长中的肿瘤会引发一种适应性免疫反应，该反应由抗体和产生肿瘤特异性细胞因子的细胞组成¹. IFNγ和IL-4的检测可作为反应质量的表征。IFNγ通过增强T细胞介导的细胞毒性来抑制肿瘤生长。相反，IL-4通过多种免疫抑制作用促进肿瘤生长。这种二分法通常被称为Th1/Th2平衡². 如图2所示，抗PD-1增加了肿瘤反应细胞产生IFNγ的频率离体刺激。相反，IL-4产生细胞的频率没有显著增加，提示检查点抑制触发了抗肿瘤保护性免疫的增强。支持这一点的是，产生IFNγ细胞频率最高的小鼠体内肿瘤体积最小。此外，抗-PD-1增加了IFNγ/IL-4产生细胞的比率，这同样在肿瘤最小的小鼠中最为明显。

综上所述，这个数据集展示了ELISpot/FluoroSpot如何进一步揭示药物对肿瘤特异性免疫反应的影响。此外，由于可以用少量血液进行分析，因此ELISpot/荧光斑点可以纵向应用于疗效臂。因此，无需在研究中添加第二个取样臂，就有机会获得对药物活性的机械洞察。有关ELISpot/荧光点如何应用于临床前肿瘤学和免疫肿瘤学研究的更多信息，请联系科文斯临床前肿瘤学的科学家。yaboapp体育官网

参考文献：

¹豁免；52.1（2020）：36-54

²癌症免疫学，免疫治疗；57.8（2008）：1125-1136。